[发明专利]一种鹅α‑干扰素单链抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种单链抗体及其制备方法和应用，尤其涉及一种鹅α-干扰素单链抗体及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

干扰素(IFN)是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制，其类型分为三类，α-(白细胞)型、β-(成纤维细胞)型，γ-(淋巴细胞)型；同时还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质(主要是糖蛋白)，是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。

定量检测机体内产生的干扰素，可以了解机体的针对病原的免疫状态。现常用于干扰素检测水平的方法主要有微生物法、仪器分析法和免疫分析法。微生物检测法虽然经济、操作简便，但在样本中有其他微生物抑制剂存在时，其灵敏度和特异性受到限制；高效液相色谱分析法、气谱、气质联机法等单纯的仪器分析方法，虽然灵敏度高，但样本前处理及测定操作烦琐，费用高，不适宜于大量样本筛查。而免疫分析法具有操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点。

目前，用于免疫检测的抗体都是单克隆抗体或多克隆抗体。制备单克隆抗体或多克隆抗体的整个生产过程复杂，消耗时间长，费用高，且不易进行操作。单链抗体是将抗体重链可变区和轻链可变区基因通过一个短肽链连接后融合表达出来的抗体片断，具有分子量小、特异性高、结合力强、易于利用基因工程技术操作等优点。所以利用单链抗体可以很好的检测机体内产生的干扰素，实现对机体免疫状态的了解。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种鹅α-干扰素单链抗体及其制备方法和应用，还有单链抗体的编码基因。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种鹅α-干扰素单链抗体，所述单链抗体为由重链可变区、连接重链可变区和轻链可变区组成的多肽，所述连接重链可变区位于重链可变区和轻链可变区之间，所述重链可变区如序列表的序列1自N末端起第1～115位氨基酸残基所示，所述轻链可变区如序列表的序列1自N末端起第131～241位氨基酸残基所示(其后可以再跟上一个氨基酸终止子Ter)。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，所述连接重链可变区如序列表的序列1自N末端起第116～130位氨基酸残基所示。

本发明还包括了一种编码所述鹅α-干扰素单链抗体的基因，由重链可变区的编码序列、连接重链可变区的编码序列和轻链可变区的编码序列组成。

进一步，所述重链可变区的编码序列如序列表的序列2自5’末端第1～345位核苷酸所示的DNA分子，所述轻链可变区的编码序列如序列表的序列2自5’末端第391～723位核苷酸所示的DNA分子(其后可以再跟上3位编码基因TGA，作为终止子)。

进一步，所述连接重链可变区的编码序列如序列表的序列2自5’末端第346～390位核苷酸所示的DNA分子。

进一步，所述基因为如序列表的序列2自5’末端第1～723位核苷酸所示的DNA分子。

含有以上所述基因的重组载体、重组菌或表达盒均属于本发明的保护范围。

所述重组载体具体可为将所述基因插入pET32a质粒得到的重组质粒，更具体可为将所述基因插入pET32a质粒的Xba I和Not I酶切位点之间得到的重组质粒。

所述重组菌具体可为将所述重组质粒导入大肠杆菌得到的重组菌，更具体可为将所述重组质粒导入大肠杆菌BL21菌株得到的重组菌。

所述表达盒是由启动子、终止子以及所述基因共同组成，能在特定组织中表达并易于检测的一组DNA序列。

本发明还保护一种鹅α-干扰素单链抗体的制备方法，发酵培养所述的重组菌，得到单链抗体。

本发明的单链抗体(ScFv)是用基因工程方法将抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一段连接肽(Linker)连接而成的重组抗体，是保持了亲本抗体的抗原亲和活性和特异性的最小功能性抗体片段，可通过基因工程技术体外表达得到，可在细菌中经济地大规模生产，从而使得免疫检测用抗体的生产变得非常容易、简便和经济，进而大大减少检测试剂的费用，比杂交瘤细胞培养得到单抗的方法要简单得多。