[发明专利]一种贝氏柯克斯体核酸检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及贝氏柯克斯体核酸检测试剂盒，特别是涉及一种利用复合探针实时荧光PCR技术检测贝氏柯克斯体的试剂盒。该试剂盒通过对样本中的贝氏柯克斯体进行定性检测，可应用于含贝氏柯克斯体感染的辅助诊断。

背景技术

贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii，CB)是常见的人畜共患自然疫源性疾病Q热的病原体，是一种严格寄生活细胞的革兰阴性菌。该病原体对理化因子抵抗力强，在不同外界环境中可长期存活，在宿主细胞的吞噬溶酶体内增殖，适宜pH值为4.5～5.0。通常是通过气溶胶传播，人类和动物普遍易感，它能引发世界范围的流行。但是动物除了偶尔出现流产外，一般没有临床表现，可在人体却能引发严重的疾病。临床表现Q热主要分为两类，急性和慢性。急性q热的症状类似于流感发热，可用广谱抗生素治疗。相比之下，慢性Q热通常表现为慢性心内膜炎或肝炎，需要长时间的抗生素治疗。因其具有广泛应用性、环境稳定性和低敏感剂量，贝氏柯克斯体被认为是一种潜在的生物恐怖剂，并被美国列为B类生物战剂。[Levy P Y，Drancourt M，Etienne J，et al.Comparison of different antibiotic regimens for therapy of32cases of Q fever endocarditis[J].Antimicrobial Agents Chemotherapy，1991，35(3)：533-537；Madariaga MG，Rezai K，Trenholme GM，Weinstein RA：Q fever：a biological weapon in your backyard.Lancet Infect Dis2003,3：709-721；Raoult D，Marrie T，Mege J.Natural history and pathophysiology of Q fever.Lancet Infect Dis2005；5：219-26]。

许多基因的DNA序列，如27×10³外膜蛋白基因(coml)、异柠檬酸脱氢酶基因(icd)、荚膜合成基因(mucZ)和传感器样基因(qrsA)基因等，已被用来从分子水平分析贝氏柯克斯体各株间的遗传相关特性。有文献报道icd序列中的碱基突变可区分来自急、慢性Q热的分离株。和其他细菌的同源不同，贝氏柯克斯体的基因是酸诱导的，这个特点可能与细菌能在宿主细胞的吞噬溶酶体恶劣的酸性环境中的复制能力有关。由于icd是一种管家基因，它并不是重要的毒性因子，不能直接把这些突变同细菌的致病性突变联系起来。这些点突变是怎样在进化过程中形成的和他们在一组特异性的贝氏柯克斯体分离株中发挥了什么作用还是未知的。由于发现icd上的突变位点会导致细胞变得更加耐酸，贝氏柯克斯体上的icd基因的突变可能会某种程度上使其不能有效的对生物体的细胞介导产生反应，从而使立克次体更好的适应特定的组织或器官。[Nguyen S V，Hirai K.Differentiation of Coxiella burnetii isolates by sequence determination and PCR restriction fragment length polymorphism analysis of isocitrate dehydrogenase gene[J].FEMS microbiology letters，1999，180(2)：249-254；Klee S R，Tyczka J，Ellerbrok H，et al；Guatteo R，Beaudeau F，Joly A，et al.Assessing the Within-herd Prevalence of Coxiella burnetii Milk-shedder Cows using a Real-time PCR Applied to Bulk Tank Milk[J].Zoonoses and public health，2007，54(5)：191-194]。

临床微生物实验室对贝氏柯克斯体的检测较为困难，主要原因包括：1)血清学诊断在发病一周内很难检测到抗体，而且病原分离操作复杂，且分离率十分低；2)病原学检查耗时长加之分离操作过程中存在随时致人受染的危险；3)Q热临床表现的多型以及多种并发症的可能出现，给临床诊断带来一定的困难。现将目前临床上检测贝氏柯克斯体的主要方法分述如下：