[发明专利]纳米荧光检测探针及其用作单联或多联核酸扩增检测试剂盒的用途

说明书

技术领域

本发明涉及核酸扩增检测技术领域，尤其是涉及一种纳米荧光检测探针及其用作单联或多联核酸扩增检测试剂盒的用途。 

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)是无需使用活生物体而酶促复制DNA的分子生物学技术。PCR在医学和生物研究实验室中普遍用于多种任务，例如检测遗传疾病、鉴定基因指纹、诊断感染性疾病、克隆基因、亲子鉴定和DNA计算。由于其无与伦比的扩增和准确性能力，分子生物学家已将PCR作为核酸检测的首选方法。通常在PCR反应的终点或平台期进行DNA检测，这使得难于定量起始模板。实时PCR或动态PCR通过随着反应进程而记录扩增子浓度而提高了终点PCR分析的性能。扩增子浓度最常通过与被扩增靶标相关的荧光信号变化来记录。荧光探针的信号强度、灵敏度直接影响了PCR检测结果的灵敏性和准确性，因此研究一种灵敏度高、光稳定性强、合成成本低的荧光探针用于PCR扩增已成为目前研究的热点。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种纳米荧光检测探针，通过在纳米荧光检测探针碱基两端使用纳米荧光微粒标记，使其能够适用于单联或者多联的核酸扩增检测试剂盒。 

本发明同时还要提供一种纳米荧光检测探针用作单联或多联核酸扩增检测试剂盒的用途，采用本发明中的纳米荧光微粒应用于核酸扩增检测， 可以大大提高核酸扩增检测的灵敏度，且降低了核酸扩增检测的检测分析成本。 

为实现上述目的，本发明提出如下技术方案：提供一种纳米荧光检测探针，包括荧光探针，所述荧光探针与靶序列负链互补，且所述荧光探针5’端和纳米荧光微粒结合，3’端带一延伸阻断分子磷酸，所述纳米荧光微粒具有包括内核与外壳的核壳结构，粒径为200～400nm，所述内核为包含有荧光分子的聚合物微粒，所述外壳具有修饰在所述聚合物微粒外表面上的一种或多种官能团，所述聚合物微粒为聚甲基丙烯酸甲酯的微粒或甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物的微粒或两者的混合物，其中甲基丙烯酸甲酯的重量至少占所述纳米荧光微粒总重量的50％，所述的荧光分子的重量占所述纳米荧光微粒总重量的0.05％～5％。 

优选地，还包括与所述荧光探针具有互补序列的淬灭探针，所述淬灭探针5’端和荧光探针5’端互补，其3’端连接一个淬灭分子对甲基红，且所述淬灭探针与所述荧光探针的长度不等。 

更进一步地，所述甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物中，甲基丙烯酸甲酯与所述其它单体的结构单元数均大于等于50。 

所述其它单体为选自氟乙烯、氯乙烯、溴乙烯、乙烯碘化、苯乙烯以及丙烯酸中的一种或多种。 

所述官能团为选自羧基，乙醇胺基，羟基，胺基，氨基，亚胺基，环氧基，异氰酸酯基，金属醇盐及聚乙二醇基中的一种。 

所述荧光分子为罗丹明、荧光素及其衍生物、肾上腺素染料及氟硼莹中的一种或多种。 

优选地，所述荧光分子的重量为所述纳米荧光微粒总重量的0.2％～5％。 

优选地，所述纳米荧光微粒的粒径为200～300nm。 

本发明采取的又一技术方案是：一种纳米荧光检测探针用作单联或多联核酸扩增检测试剂盒的用途，所述纳米荧光检测探针可用作单联或多联 核酸扩增检测试剂盒。 

优选地，所述核酸扩增检测试剂盒包括对于单一检测目标以及多项检测目标同步检测的试剂盒。 

与现有技术相比，本发明的有益效果是： 

1、本发明采用的纳米荧光微粒具有使用寿命长，制备稳定且具有良好的单分散性等优点，是非常好的荧光信号放大的载体，其与荧光探针结合后形成的检测探针，是荧光检测技术中高灵敏度分析检测和定量测试中的理想检测探针。 

2、本发明中的纳米荧光微粒非常稳定，受外界影响小，荧光稳定，这为通过荧光进行定量检测的核酸扩增检测提供了良好的检测条件，将其表计的荧光检测探针应用于核酸检测中，可以大大提高检测灵敏度。 

3、本发明中的纳米荧光检测探针制备方法简单，降低了核酸扩增检测试剂盒的检测分析成本。 

附图说明

图1、图2是本发明实施例1制备的纳米荧光微粒的扫描电镜示意图； 

图3～6是本发明核酸扩增检测在四种波长下的检测波形示意图； 

图7是本发明荧光纳米检测探针用于PCR检测与常见荧光物的对比检测波形示意图。 

具体实施方式