[发明专利]转基因水稻科丰2号品系特异性实时荧光定量PCR检测引物、检测方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201410081751.0 | 申请日： | 2014-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN104031982A | 公开（公告）日： | 2014-09-10 |
| 发明（设计）人： | 宛煜嵩;梁利霞;张秀杰;朱祯;金芜军;苗朝华;李亮;董美 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京康思博达知识产权代理事务所(普通合伙) 11426 | 代理人： | 余光军 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因 水稻 品系 特异性 实时 荧光 定量 pcr 检测 引物 方法 试剂盒 | ||
1.用于检测转基因水稻科丰2号品系特异性的实时荧光定量PCR检测引物及探针，其特征在于：所述引物的核苷酸序列分别为SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.4所示。
2.一种转基因水稻科丰2号品系特异性的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括：（1）提取待检测水稻样品的DNA；（2）以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示核苷酸为扩增上、下游引物建立PCR反应体系并进行PCR扩增；（3）根据收集的荧光曲线和Ct值判定结果。
3.按照权利要求2所述的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括：在反应体系正常的情况下，如果待检测样品出现典型扩增曲线，且Ct值小于或等于38，则表明待检测样品中含有转基因水稻科丰2号转化体成分。
4.按照权利要求2所述的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于：所述的PCR反应体系的总体积为20.0μL，其中，2×Mix10.0μL，10.0μmol/L SEQ ID No.2所示的上游引物0.8μL，10.0μmol/L SEQ ID No.3所示的下游引物0.8μL，10.0μmol/L SEQ ID No.3所示探针0.4μL，25ng/μL DNA模板2.0μL，余量为双蒸水。
5.按照权利要求2所述的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于：所述的PCR扩增条件为：第一阶段95℃，10min；第二阶段95℃，15s，95℃，60s，循环数40。
6.一种转基因水稻科丰2号的品系特异性的实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括：2×Mix，扩增引物对，探针和双蒸水；其特征在于：所述扩增引物对的核苷酸序列分别为SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.4所示。
7.按照权利要求6所述的实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：含有SPS内标准基因扩增体系。
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