[发明专利]转基因水稻PA110-15外源插入片段旁侧序列及应用

权利要求书

1.转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系外源插入基因和5’端水稻侧翼序列的连接区序列，其特征在于：其为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

2.转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系外源插入基因和3’端水稻侧翼序列的连接区序列，其特征在于：其为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

3.权利要求1所述的连接区核苷酸作为检测转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系靶基因中的应用。

4.权利要求2所述的连接区核苷酸作为检测转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系靶基因中的应用。

5.转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系特异性的PCR检测引物，其特征在于，选自以下8对引物中的任意一对：核苷酸序列为SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对1；核苷酸序列为SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的引物对2；核苷酸序列为SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示引物对3；核苷酸序列为SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示的引物对4；核苷酸序列为SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示的引物对5；核苷酸序列为SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示的引物对6；核苷酸序列为SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示的引物对7；核苷酸序列为SEQ ID No.17和SEQ ID No.18所示的引物对8。

6.一种转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系特异性的PCR定性检测方法，其特征在于，包括：（1）提取待检测水稻样品的DNA；（2）以提取的DNA为模板，以权利要求5所述PCR检测引物对建立PCR反应体系并进行PCR扩增；（3）如果从待检测的样品中扩增出预期的目的条带，则待检测的水稻样品是转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系或其衍生系；相同条件下，如果从待检测的样品中未能扩增出预期的目的条带，则待检测的水稻样品不是转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系或其衍生系。

7.一种转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系特异性的PCR定性检测方法，包括：（1）提取待检测水稻样品的DNA；（2）以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对建立PCR反应体系并进行PCR扩增；（3）如果从待检测的样品中扩增出262bp的目的条带，则待检测的水稻样品是转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系或其衍生系；相同条件下，如果从待检测的样品中未能扩增出262bp的目的条带，则待检测的水稻样品不是转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系或其衍生系。

8.一种转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系特异性PCR检测方法，该方法包括：（1）提取待检测水稻样品的DNA；（2）以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示的引物对建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；（3）如果从待检测的样品中扩增出376bp的条带，则待检测的水稻样品是转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系或其衍生系；相同条件下，如果从待检测的样品中未能扩增出376bp的条带，则待检测的水稻样品不是转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15品系或其衍生系。

9.按照权利要求6-8任何一项所述的PCR定性检测方法，其特征在于，所述的PCR反应体系为：反应体系的总体积为25.0μL，其中，10×PCR缓冲液2.5μL，25mmol/L氯化镁溶液1.5μL，10mmol/L dNTPs混合溶液（各2.5mmol/L）2μL，10μmol/L上游引物0.5μL，10μmol/L下游引物0.5μL，5U/μL Taq酶0.125μL，25mg/L DNA模板2.0μL，余量为双蒸水；

所述的PCR扩增条件为：95℃变性5min；95℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共进行35次循环；72℃延伸7min。

10.一种转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻PA110-15的品系特异性PCR定性检测试剂盒，包括：10×PCR缓冲液，氯化镁溶液，dNTPs混合溶液，检测上下游引物对，Taq酶和双蒸水；其特征在于：所述检测上下游引物为权利要求5所述的PCR检测引物。