[发明专利]一种正品冬虫夏草的检测方法有效
申请号: | 201410082003.4 | 申请日: | 2014-03-07 |
公开(公告)号: | CN104076082A | 公开(公告)日: | 2014-10-01 |
发明(设计)人: | 国锦琳;陈璐;彭成;万德光 | 申请(专利权)人: | 成都中医药大学 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447;G01N1/28;G01N1/34 |
代理公司: | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人: | 李高峡;张娟 |
地址: | 611137 四川*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 正品 冬虫夏草 检测 方法 | ||
1.10种蛋白质,其特征在于:它们的分子量和N端序列分别如下:
蛋白1:分子量为13.136KDa,N端序列为GAVLWVPSV;
蛋白2:分子量为11.749KDa,N端序列为DQEYTVF;
蛋白3:分子量为13.871KDa,N端序列为KRHEVVYPW;
蛋白4:分子量为22.535KDa,N端序列为YWSMNEK;
蛋白5:分子量为35.674KDa,N端序列为HRDQNPE;
蛋白6:分子量为34.061KDa,N端序列为CMTWYE;
蛋白7:分子量为36.931KDa,N端序列为LPWFRHY;
蛋白8:分子量为39.032KDa,N端序列为PVAGMSK;
蛋白9:分子量为96.178KDa,N端序列为CTWSPRV;
蛋白10:分子量为95.497KDa,N端序列为GAVLWVPSV。
2.一种正品冬虫夏草的检测方法,其特征在于:它是检测待检样品含有权利要求1所述10种蛋白中任意一种或者任意多种蛋白的方法。
3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于:它包括如下步骤:
(1)取待检样品,组织破碎,用中性缓冲液浸提,离心,得上清液;
(2)检测步骤(1)所得上清液含有分子量为13.136kDa、11.749kDa、13.871kDa、22.535kDa、35.674kDa、34.061kDa、36.931kDa、39.032kDa、96.178kDa和/或95.497kDa的蛋白;
优选地,步骤(1)所述组织破碎的方法为液氮研磨法;
优选地,步骤(1)所述中性缓冲液是磷酸盐缓冲液;进一步优选地,所述磷酸盐缓冲液的pH为7.3;
优选地,步骤(1)所述中性缓冲液中添加有抗氧化剂和表面活性剂;进一步优选地,所述抗氧化剂为β-巯基乙醇;所述表面活性剂为Tween80;
优选地,步骤(1)所述浸提的时间是1~4h。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于:所述β-巯基乙醇的浓度为0.2%~1%(w/v);所述Tween80浓度为0.2%~1%(w/v)。
5.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于:所述β-巯基乙醇的浓度为0.2%(w/v);所述Tween80浓度为0.5%(w/v)。
6.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于:步骤(2)所述检测的步骤如下:
1)取步骤(1)所述上清液,纯化,得纯化蛋白液;
2)上样,电泳,染色,洗脱,即可。
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