[发明专利]一种猴系统性帕金森病模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物疾病模型的建立方法，特别是涉及一种猴系统性帕金森病模型的建立方法。

背景技术

帕金森病是—种影响患者活动能力的中枢神经系统慢性疾病，多发生于中老年以上的人群。本病早期主要表现包括静止性震颤、肌强直、行动缓慢、动作起动困难和姿势异常等。静止性震颤即患者的手或臂不受控制地发抖，在休息时出现或情绪紧张时加重；其它早期症状包括开始活动时感到困难，其后双臂和双腿经常震颤，上肢不能作精细动作，乃致日常生活不能自理，如穿衣、脱鞋、洗漱都感到困难。本病在整体人群中的发病率为0.1%，65岁以上人群达1%，90岁以上人群高达6.1%，随着社会人口的自然老化，患病人数正逐年增加，该病已成为影响中老年人群生活质量和寿命的重要的、常见的神经变性性疾病之一。因此复制本病模型、筛选模型鉴定指标、建立模型长期维持方法，为帕金森病的深入研究提供良好的动物模型就显得非常重要了。

基于帕金森病发病机制研究、药效学和其他治疗评价临床前等研究目的，需要借助具有与临床帕金森病人发病过程、临床表现相似并且持续稳定、能被客观评价的灵长类帕金森病模型。但在此领域当今的应用技术中，1-甲基-4苯基-1，2，3，6四氢吡啶（MPTP）非人灵长类帕金森病(PD)模型目前被认为最有效的、最为理想的模型。如申请公布号为CN102526047A的中国专利，公开了一种慢性全身性猴帕金森病模型的制备方法，该方法为：将剂量为0.2mg/kg的MPTP施用于猴，自首次施用日起，每间隔2天施用相同剂量MPTP，连续施用7次；其后改为每隔3天施用1次，连续注射7次；每隔3天施用1次，连续施用7次；所述的MPTP施用方法是静脉注射；所述猴为猕猴，年龄为5-6岁。申请公布号为CN102526764A的中国专利，公开了一种猴重度全身性帕金森病模型的制备方法，将剂量为0.5mg/kg的MPTP施用于猴，每日施用一次，连续施用4日，MPTP施用方法是臀大肌肌肉注射。申请公布号为CN101779609A的中国专利，公开了一种用低剂量MPTP建立雄性猕猴慢性帕金森病模型的方法，该方法按以下步骤进行:(1)给雄性猕猴肌肉注射MPTP三个月或三个月以上的时间，每隔2-3天注射1次，每次0.2-0.4mg/kg，在注射MPTP的期间，对猕猴每隔1-2天做一次行为观察，注射持续到猕猴出现震颤症状为止；(2)该猕猴在注射MPTP以前进行MRI扫描，得到正常期的图谱，对步骤1注射MPTP过程中的称猴每20-40天进行一次MRI检测，其结果和正常期的图谱进行对比，以观察脑内黑质区的改变进程；(3)该猕猴在注射MPTP以前进行SPECT扫描，得到正常期的图谱，对步骤1注射MPTP过程中的猕猴每20-40天进行一次SPECT检测，其结果和正常期的图谱进行对比，以观察纹状体成像上的改变进程；(4)注射过MPTP的猕猴，如果行为观察猴出现震颤，并且在MRI成像上观察到脑内黑质区有神经元缺损，同时在SPECT成像上显示纹状体有神经元缺损，则表明该猕猴就是成功建立的模型。

尽管如此，在当前应用的非人灵长类MPTP PD模型除尚未见有典型的病理特点和存在种属差异外，仍存在以下局限性，从而限制了其应用：（1）个体差异较大，不同个体猴子对MPTP的敏感性存在差异,给予同样的剂量的MPTP，每个动物的反应存在很大差别，症状轻重不一，使得不同研究之间不易进行比较；（2）在轻中度损害的模型易出现自发性恢复，这与PD进行性加重的特点不相一致，其对于模型是否会出现自发性恢复缺乏前瞻性的有效的预测，既往研究多集中在对模型某个阶段的模拟，而对模型临床演进和转归的全过程缺乏整体的研究，而这对预测、判断模型临床演化、转归和选择性的应用具有重要意义；（3）由于老年猴有限，大部分的模型均使用年龄较小的猴子，而PD发病多在中年以后，而研究表明年龄较大的猴较之年轻的猴子MPTP造模后出现自发性恢复的可能性较年轻猴要小；（4）MPTP模型不是慢性进行性的损害，相对急性的MPTP的应用导致急性的损害，不能完全模拟PD缓慢进行性进展的特点。

发明内容

本发明针对上述应用的局限性，选用中老年食蟹猴，采用个体化原则，建立系统性MPTP模型，给予食蟹猴小剂量MPTP注射直到出现典型的PD行为学表现后停止使用，并连续、长期观测临床演化和转归过程，避免自发性恢复的发生，建立与原发性PD更为接近的灵长类MPTPT PD模型，从而为PD发病机制研究、药效学研究和其他转化医学临床前研究提供稳定的模型载体。

本发明是通过以下技术方案实现的：