[发明专利]三角褐指藻和小新月菱形藻混合培养的培养基及培养方法

说明书

技术领域

本发明属于微藻养殖领域，尤其涉及一种三角褐指藻和小新月菱形藻混合培养高产技术。

背景技术

三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum Bohlin是一种海洋单细胞微藻，隶属硅藻门，羽纹纲，褐指藻目，褐指藻科，褐指藻属。细胞卵形、梭形或放射形，在不同环境条件下形状可以转变。卵形细胞长8微米，宽3微米，只有一个硅质壳面，中心有一细胞核，有黄褐色色素体1-3片。梭形细胞长20微米，两臂末端较钝。平行分裂成2个形态相同细胞进行繁殖。细胞无硅质壳，故在裂殖时出与硅藻不一样，藻体不缩小。在9-92‰盐度范围内生活，最适盐度为25-32‰。适温范围5-25℃，最适10-20℃，在0℃条件下仍能繁殖，超过25℃停止生长，随温度升高逐渐大量死亡。适宜光照强度1000-8000lux，最适3000-5000lux，小型培养时忌强烈阳光直射。pH7-10环境下均能生长、繁殖，最适7.5-8.5。该藻营养价值极高，除富含蛋白质、脂类和多糖，可贵的是它含有EPA、DHA等被称为“脑黄金”的多不饱和脂肪酸，且生长繁殖快，易培养。作为鱼、虾、贝等海洋动物最佳开口饵料，是最早进行人工培养的海洋微藻，已在栉孔扇贝、马粪海胆、日本对虾、牡蛎、文蛤、贻贝、舌鳎、银鲛、鲍鱼、梭子蟹等多种名贵海产经济动物苗种生产中应用。

小新月菱形藻Nitzschia closterium属硅藻门，羽纹纲，双菱形目，菱形藻科，菱形藻属，细胞中央膨大成纺锤形，两端渐尖，似月牙形。细胞长12-23微米，宽2-3微米，中央有一细胞核。色素体黄褐色，两片，位于核两侧。分布于世界各海水、半咸和淡水水域，我国各海区均有。最适盐度范围25-32‰，适温15-20℃，水温超过28℃，停止生长；最适光照强度3000-8000lux，培养时忌直射阳光；适宜pH7-10，最适7.5-8.5。小新月菱形藻俗称“小硅藻”，富含蛋白质、碳水化合物及多种高不饱和脂肪酸，是海洋经济动物大菱鲆、中国对虾、海湾扇贝、鲍鱼、马粪海胆和海参的良好饵料，能促进幼体和亲体生长发育，增强幼苗抗病力，有重要培养价值。

海水中无机碳的存在形式以HCO₃^-为主(占90％)，而游离的CO₂不足1％。过去人们一直认为，水体中游离CO₂是藻类利用外源无机碳的唯一形式。张学成的工作表明，螺旋藻培养基中添加50-100mmol/L NaHCO₃，不仅可以满足螺旋藻生长的需要，而且有助于保持藻体生长的pH值。林惠民认为，NaHCO₃可作为藻类生长的碳源。我的研究表明三角褐指藻和小新月菱形藻可以利用HCO₃^-作为碳源。

温度、光照、盐度、营养盐等对三角褐指藻和小新月菱形藻生长都有重要影响。氮在细胞代谢中是形成氨基酸、嘌呤、嘧啶、卟啉、氨基糖和胺化合物等的基本元素，因而氮是三角褐指藻和小新月菱形藻生长最重要的营养元素。我的研究显示，对三角褐指藻和小新月菱形藻来说，尿素用作氮源无论对细胞的生长繁殖、不饱和脂肪酸合成、色素积累等方面的效果均优于NaNO₃和NH₄Cl。人尿中95％是水，5％是可溶性无机盐，其中2％是尿素。在藻细胞的氮代谢中，氮必须以NH₄⁺的形式与细胞内的碳水化合物衍生的酮酸作用生成氨基酸，再合成蛋白质。已经证实许多藻含有尿素酶，在它的催化作用下，尿素分解出氨被微藻利用，酶功能的差异是造成各种微藻利用尿素能力差异的主要原因。孙凌毅指出，三角褐指藻对铵盐和尿素的利用强于硝酸盐。张贵杰等研究指出培养小新月菱形藻以尿素效果最好，硝酸钠次之，氯化铵最差。张青田等认为以尿素为氮源培养三角褐指藻效果强于氯化铵。本人研究证实每升培养液中添加适量的的尿液对三角褐指藻和小新月菱形藻生长有较好促进作用。