[发明专利]一种铜绿假单胞菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于环境及生物技术领域，尤其涉及一种铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)DSP-05及其在毒死蜱生产废水中毒死蜱降解中的应用。

背景技术

有机磷农药(Organophosphate pesticides OPs)作为杀虫剂在农业上被广泛应用，是当今农药中的主要类别，长期在国内外大量生产和广泛使用。有机磷农药具有诱变性和致畸性，哺乳动物的神经和免疫系统疾病如疯牛病、克雅病、海湾战争综合症、帕金森综合症等大多与其有关。残留在蔬菜、水果及动物性食品上的有机磷农药由于能够抑制人体内乙酞胆碱酷酶的功能从而对人存在着程度不同的毒性，其中慢性毒性可诱导多发性神经病、中风等，急性中毒可引起人肌肉痉挛、瞳孔收缩、呼吸困难直至死亡。

毒死蜱是一种高效、广谱有机磷杀虫剂，对害虫具有触杀、胃毒和熏蒸作用，尤其对褐飞虱的防治有非常好的效果。目前它是全球应用最广泛的五种杀虫之一。由于它的生物体内积累作用，会对周围的环境、海中的生物体以及人类产生危害作用。我国农药生产毒死蜱过程中产生的废水中均会含有不同浓度的原药，造成废水难以进行生物降解。在毒死蜱的田间施用过程中，也有很大一部分会散落在农田生态系统中，影响农业生态平衡。微生物降解具有成本低、效率高、无二次污染、生态恢复性好等优点，已在很多方面得到应用，所以筛选出毒死蜱降解菌对于处理毒死蜱生产废水具有重大意义。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术的不足，本发明的第一目的在于提供一种对毒死蜱具有降解作用的铜绿假单胞菌。

本发明的第二目的在于提供一种将所述铜绿假单胞菌制备成固定化小球后在毒死蜱降解中的应用。

技术方案：为了解决上述第一目的，本发明所采用的技术方案为：一种铜绿假单胞菌，其分类命名为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）DSP-05，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC），保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101，保藏编号为：CGMCC No.8390，保藏日期为2013年10月24日。

为了解决上述的第二目的，本发明所采用的技术方案为：所述铜绿假单胞菌制备成固定化小球后在毒死蜱降解中的应用所述的解淀粉芽孢杆菌在抑制草莓炭疽菌生长中的应用。

具体应用为：先将固定化小球在毒死蜱生产废水中曝气12h进行活化，活化过程中水温26℃-30℃，曝气量为1.2L/min；然后在温度为26℃-30℃、pH值为6.8-7.2、毒死蜱进水浓度200mg/L、水力停留时间为32h的条件下，每升毒死蜱废水采取185mL的固定化小球来处理。

更进一步的，将所述铜绿假单胞菌制备成固定化小球的方法包括以下步骤：

（1）用接种环在斜面培养基上挑取少量铜绿假单胞菌菌种接种于LB液体培养基中于30℃，160r/min条件下振荡培养至对数期；

（2）将上述培养好的菌液于8000r/min的条件下离心2min，倒掉上清液，加入相同体积的无菌水，摇匀后于8000r/min的条件下离心2min，重复操作两遍，用相同体积的无菌水悬浮，制成菌体液；

（3）取1mL菌体液与20mL的质量浓度为4%的海藻酸钠溶液于室温混匀，然后用注射器将混合液滴入室温下的质量浓度为3%的CaCl₂溶液，于4℃下交联钙化6h后得到海藻酸钙凝胶固定化小球，无菌水洗两遍保存于4℃备用。

更进一步的，上述步骤（1）中LB培养基的配方为：1000mL蒸馏水，酵母粉5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠10.0g，pH7.0。

本发明中所述的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）DSP-05的生理活性特征如下：

所述铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）DSP-05主要生物学特性为G-，该菌氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖和木糖，产酸不产气，但不分解乳糖和蔗糖。液化明胶、可分解尿素，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气。

革兰氏染色表现为阴性；吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性；通过BLAST比对该菌株的16SrDNA基因序列，鉴定其为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是：