[发明专利]一种土壤抑菌活性的测定方法及其应用

权利要求书

1.一种土壤抑菌活性的测定方法，其特征在于，取一定量的土壤浸出液，接种某一土壤病原菌，在移液枪枪头中进行微培养，通过对病原菌的生长量测定，来测定土壤的抑菌活性。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述测定方法具体包括以下步骤：

（1）土壤浸出液的收集：将待测定土壤中加入去离子水，静置过夜；收集土壤的浸出的液体，离心，取上清液，用微孔滤膜进行上清液的过滤除菌处理，收集无菌的土壤浸出液，备用；

（2）土壤病原菌的接种、培养：将称重后的空枪头进行灭菌，将土壤浸出液加入空枪头中，枪头下端先用parafilm膜包裹以防漏液，将枪头放入玻璃试管中，加入培养液，病原菌液，枪头上端盖上无菌塑料盖，将试管放置在泡沫箱中进行保湿培养，培养温度为28℃，培养时间为4到6d；培养后期用针刺穿parafilm膜，将枪头进行离心，去除液体，菌丝体仍保留在枪头中，去除枪头下端的parafilm膜后，对枪头进行称重；

（3）重复步骤（2），将土壤浸出液替换为无菌水，作为对照组；

（4）菌丝体重量的计算：根据步骤（2）称量出的培养前空枪头的重量与培养后枪头的重量，做差，得出培养组菌丝体重量W2；

根据步骤（3）称量出的培养前空枪头的重量与培养后枪头的重量，做差，得出对照组菌丝体重量W1；

（5）土壤抑菌活性的计算：

Iw=（W1-W2）/W1*100%；

其中：Iw为土壤抑菌活性。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于：所述步骤（1）中将60份土壤分装到三个花盆中，分别向每个花盆中加入3份去离子水，静置后，将三个花盆中的浸出液体混合，离心，取上清液，过滤除菌，收集无菌的土壤浸出液。

4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于：静置时间为12小时，离心速度为10000rpm。

5.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于：所述步骤（2）中的培养液为真菌培养液，所述病原菌液为病原真菌孢子液。

6.根据权利要求5所述的测定方法,其特征在于:所述真菌培养液为GY培养液。

7.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于：所述步骤（2）中土壤浸出液、培养液、病原真菌孢子液的体积比为7:1:0.05，所述步骤（2）中枪头的离心速度为1000rpm,离心时间为40s。

8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于：所述病原真菌孢子液为寄生曲霉孢子悬液。

9.一种如权利要求1所述的测定方法的应用，其特征在于：利用所述测定方法，测定施用了土壤添加剂的土壤的抑菌活性，以筛选土壤抑菌活性高的土壤添加剂。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

（1）对施用土壤添加剂A的土壤，利用如权利要求1所述的测定方法，测定其土壤抑菌活性Iw_A；

（2）对未施用任何土壤添加剂的土壤，利用如权利要求1所述的测定方法，测定其土壤抑菌活性Iw₀；

（3）当Iw_A高于Iw₀时，说明土壤添加剂A能特异性的增加土壤的抑菌活性。