[发明专利]禾谷缢管蚜ACT1内参基因部分序列、克隆方法及应用

权利要求书

1.禾谷缢管蚜ACT1基因片段，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种禾谷缢管蚜ACT1基因的部分序列的克隆方法，提取禾谷缢管蚜基因组总RNA，采用引物ACT1R进行RT-PCR扩增，以产物第一链cDNA作为模板、以引物对ACT1F/ACT1R进行PCR扩增，得到阳性克隆，最后经测序验证。其中引物序列为：

ACT1F:5′-ATGTGTGACGAAGAAGTAGC-3′；

ACT1R:5′-TTAGAAGCACTTTCTGTGC-3’。

3.根据权利要求2所述的方法，所述PCR扩增的反应条件如下：94℃3min，[94℃45s、56℃1min、72℃1min]30个循环，72℃延长10min，4℃保存。

4.一种qPCR扩增ACT1基因部分序列的方法，抽提禾谷缢管蚜基因组总RNA，以试剂盒自带引物混合物为引物进行RT反应，然后以产物第一链cDNA作为模板进行定量PCR扩增，荧光染料为SYBR Green I，其中定量PCR扩增中的禾谷缢管蚜的定量引物，其序列为：

QACT1F：5′-AACGGAAGCACCTTTGAACC-3′；

QACT1R：5′-GGAAGAAGCAGCAGTAGCCAT-3′。

5.根据权利要求4所述的方法，所述定量PCR扩增采用两步法，即在95℃预变性15min之后，先运行40个循环的95℃10sec，59.2℃32sec，72℃32sec，再运行溶解曲线阶段的95℃15sec，60℃1min，95℃30sec，60℃15sec。

6.权利要求1所述的禾谷缢管蚜ACT1基因片段作为内参基因应用于禾谷缢管蚜功能基因或介体内黄矮病毒基因表达定量PCR检测的应用。