[发明专利]一种天然香料γ-癸内酯的发酵方法

权利要求书

1.一种天然香料γ-癸内酯的发酵方法，其特征在于以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）CGMCC No. 2.630为菌种，以蓖麻油为底物，外加猪胰脂肪酶，在有氧的条件下，通过批发酵或分批补料发酵的方法生成天然香料γ-癸内酯；

上述的批发酵或分批补料发酵的方法中：

所用发酵培养基按每升计算，由10～30g的蓖麻油、0.1～20g的   葡萄糖、0.1～3.5g的(NH₄)₂HPO₄、0.5～3.0g的KH₂PO₄、0.1～2.5g的K₂HPO₄·3H₂O、0.5～3.0g的MgSO₄·7H₂O、1.0～7.0g的NaCl、1～20g的酵母膏、0.1～2.0g的猪胰脂肪酶和余量的水组成，pH自然； 

所用补料培养基为蓖麻油,其用量按其与发酵培养基重量比计算，即发酵过程所用的补料培养基为发酵培养基的0.1～2.0%；

所述的批发酵或分批补料发酵的方法，其发酵过程中，控制参数如下：

批发酵控制转速为200-800r/min，温度28～36℃，pH自然，培养10～30h，发酵结束；

分批补料发酵控制转速为200-800r/min，温度控制在28～36℃，pH自然，培养12～30h后，一次性在无菌状态下加入0.1～2.0%的蓖麻油，继续控制转速为200-800r/min，温度在28～36℃，再培养8～18h，发酵结束。

2.如权利要求1所述的一种天然香料γ-癸内酯的发酵方法，其特征在于所述的批发酵或分批补料发酵具体包括如下步骤：

（1）、菌种的选取

即以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），保藏编号为CGMCC No. 2.630的甘油管为菌种；

（2）、培养基配制

①、斜面培养基

所述的斜面培养基按每升计算，由10g葡萄糖、12g酵母膏、10g黄豆饼粉、4gNaCl、5gCaCO₃、20g琼脂和余量的去离子水组成，pH自然，0.1 MPa,即121℃灭菌30min备用；

②、种子培养基

所述的种子培养基，按每升计算，由1.0g的蓖麻油、20g的葡萄糖、1.5g的(NH₄)₂HPO₄、3.2g的KH₂PO₄、1.5g的K₂HPO₄·3H₂O、4.0g的MgSO₄·7H₂O、3.0g的NaCl、15.0g的酵母膏和余量的水组成，pH自然；

③、发酵培养基

所述的发酵培养基，按每升计算，由10～30g的蓖麻油、0.1～20g的葡萄糖、0.1～3.5g的(NH₄)₂HPO₄、0.5～3.0g的KH₂PO₄、0.1～2.5g的K₂HPO₄·3H₂O、0.5～3.0g的MgSO₄·7H₂O、1.0～7.0g的NaCl、1～20g的酵母膏、0.1～2.0g的猪胰脂肪酶和余量的水组成，pH自然； 

④、发酵过程所用的补料培养基

发酵过程所用的补料培养基为蓖麻油，其用量按其与发酵培养基重量比计算，即发酵过程所用的补料培养基为发酵培养基的0.1～2.0%；

（3）、斜面种子培养

往茄子瓶中装入40mL斜面培养基，0.1MPa，即121℃灭菌30 min，冷却至室温，用消毒好的移液器从保存的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） CGMCC No.2.630甘油管中取2mL液体菌，在斜面培养基上划线接种，28℃培养24～32h得斜面菌；

（4）、摇瓶种子培养

将步骤（3）所得的斜面菌，用消毒好的接种铲取1cm*2cm大小的斜面菌接种至装有50mL种子培养基的500mL摇瓶中，置于摇床上控制转速为200-300r/min，温度为28℃培养24h得到种子液；

（5）、发酵罐培养

按2%接种量将步骤（4）所得的种子液接种于装有发酵培养基的发酵罐中，在有氧条件下进行批发酵或分批补料发酵；

所述的批发酵，控制转速为200-800r/min，温度28～36℃，pH自然，培养10～30h发酵结束；

所述的分批补料发酵，控制转速为200-800r/min，温度控制在28～36℃，pH自然，培养10～30h后，在无菌状态下一次性加入补料培养基后，继续控制转速为200-800r/min，温度在28～36℃，再培养8-18h，发酵结束。