[发明专利]一种双链siRNA分子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种双链siRNA分子及其应用，更具体地，本发明针对大鼠垂体瘤细胞MMQ细胞中D2R基因的核苷酸序列设计合成siRNA，所述siRNA转入MMQ细胞后能明显促进催乳素的合成和分泌。

背景技术

RNA干扰(siRNA)是机体内广泛存在的一种双链RNA介导的序列特异性基因沉默现象[Fire A.，et al.Potent and specific genetic interference by double-stranded RNAin Caenorhabditis elegans.Nature1998；391：806-811]，因其具有沉默效率高、特异性强以及操作简便等优于传统基因敲除手段的优点而得到迅速发展，现成为生命科学领域中重要的研究工具[Arziman Z.，et al.E-RNAi：a web application to design optimized RNAi constructs.Nucleic Acids Res2005；33：W582-W588]。siRNA与蛋白质结合形成RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)。该复合物能够结合到同源的mRNA上并诱导其降解。

药源性高催乳素血症是临床常见的不良反应，发生率高达42％-66％[Halbreich U.，et al..Hyperprolactinemia and schizophrenia：mechanisms and clinical aspects.Journal ofpsychiatric practice2003；9：344-353]，短期内引起泌乳、闭经，长期会造成体重增加、骨质疏松及增加乳腺癌、子宫内膜癌的发病率，严重影响患者的身心健康及治疗的依从性。

催乳素的调节是一个很复杂的系统，涉及多种神经递质、神经肽、代谢产物、机体的激素信号改变等。这些因素大体可以分为两类：催乳素释放因子(PRF)和催乳素抑制因子(PIF)[Madhusoodanan S，.et al.Hyperprolactinemia associated with psychotropics--a review.Human psychopharmacology2010；25：281-297]。多巴胺是最主要的催乳素抑制因子(PIF)，它通过垂体催乳素细胞膜上的多巴胺D2受体(D2R)，抑制催乳素的合成和释放[Cookson J.，et al.Prolactin，hyperprolactinaemia and antipsychotic treatment：a review and lessons for treatment of early psychosis.J Psychopharmacol2012；26：42-45]。

MMQ细胞是一种来源于大鼠垂体瘤细胞的典型高催乳素血症细胞模型[Judd AM.，et al.Characterization of the MMQ cell，a prolactin-secreting clonal cell line that is responsive to dopamine.Endocrinology1988；123：2341-2350]。MMQ细胞的细胞膜上含有多巴胺D2受体(D2R)，能够对多巴胺及多巴胺类药物反应。溴隐亭等多巴胺受体激动剂能够激动MMQ细胞上的D2R，抑制其胞内催乳素的分泌。临床中，甘草作为一种中草药，经常被用来治疗高催乳素血症。甘草苷是一种从甘草中提取的重要天然化合物，尽管现有文献已报道甘草苷具有治疗咳嗽、炎症、咽炎、抗心律失常、胃溃疡、肿瘤、脂肪肝、心肌缺血、脑血栓、脑缺氧等作用，还未见关于甘草苷治疗高催乳素血症的报道，但是甘草苷作为甘草中的活性成分，其作为候选药物在治疗高催乳素血症方面的疗效值得期待。为了研究候选药物对高催乳素血症的疗效及其作用机制，通常采用siRNA干扰的技术方案：利用针对D2R的siRNA，干扰D2R的功能，给研究对象施用候选药物，通过检测催乳素的合成和分泌情况，验证该候选药物是否具有治疗高催乳素血症的功效。

发明内容

本发明的目的在于公开一种高效的针对D2R基因的广谱小分子干扰RNA(siRNA)。因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种双链siRNA分子，根据本发明的实施例，该双链siRNA分子由具有下述核苷酸序列的正义链和反义链组成：

siRNA：

正义链：5’-caGCAGGATTCACTGTGACAT-3’(SEQ ID NO：1)，