[发明专利]基于荧光共振能量转移检测盐酸克伦特罗的方法

权利要求书

1.基于荧光共振能量转移检测盐酸克伦特罗的方法，其特征在于利用金纳米粒子对罗丹明B的荧光猝灭作用方法检测盐酸克伦特罗的残留量，包括以下步骤：金纳米粒子（AuNPs）的制备；通过测定荧光光谱图和紫外吸收光谱图观察罗丹明B、金纳米粒子和盐酸克伦特罗体系的反应；运用金纳米粒子对罗丹明B的荧光猝灭作用方法检测盐酸克伦特罗并进行实际样品的检测。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述金纳米粒子（AuNPs）的制备和透射电镜表征步骤如下：

制备时，向洁净的装有回流装置的三口烧瓶中加入1mmol/L的氯金酸100mL，在磁力搅拌的情况下使其沸腾，紧接着快速加入38.8mmol/L的柠檬酸三钠10mL，边加热边搅拌，待溶液由淡黄色变成酒红色，反应持续10分钟，停止加热，溶液冷却至室温后，4℃保藏，所制得的金纳米粒子粒径为13nm；

①样品制备

吸取13nm金纳米粒子200μL，娃哈哈纯净水800μL于2mL离心管中，作为对照，另一离心管中分别吸取13nm金纳米粒子200μL，娃哈哈纯净水700μL和1.6μg/mL的盐酸克伦特罗100μL，在25℃下同时培养10min；将两种样品分别滴于两个铜网上，室温晾干备用；

②参数

用TECNAI F20透射电镜于200kV的加速电压下扫描样品①的透射电镜。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述通过测定紫外吸收光谱图观察罗丹明B、金纳米粒子和盐酸克伦特罗体系的反应的步骤如下：

取五个2.0mL的离心管，编号为a,b,c,d,e，分别依次加入，a管(0.4μM罗丹明B20μL，980μL娃哈哈纯净水)，b管(0.4μM罗丹明B20μL，1.6μg/mL的盐酸克伦特罗100μL，880μL娃哈哈纯净水)，c管(0.4μM罗丹明B20μL，1.6μg/mL的盐酸克伦特罗100μL，13nm的金纳米粒子200μL，680μL娃哈哈纯净水)，d管(1.6μg/mL的盐酸克伦特罗100μL，13nm的金纳米粒子200μL，700μL娃哈哈纯净水)，e管(0.4μM罗丹明B20μL，13nm的金纳米粒子200μL，780μL娃哈哈纯净水)，然后将混合物在25℃下培养10min，测紫外吸收图。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述通过测定荧光光谱图观察罗丹明B、金纳米粒子和盐酸克伦特罗体系的反应的步骤如下：

取四个2.0mL的离心管，编号为a,b,c,d，分别依次加入，a管(0.4μM罗丹明B20μL，980μL娃哈哈纯净水)，b管(0.4μM罗丹明B20μL，1.6μg/mL的盐酸克伦特罗100μL，880μL娃哈哈纯净水)，c管(0.4μM罗丹明B20μL，1.6μg/mL的盐酸克伦特罗100μL，13nm的金纳米粒子200μL，680μL娃哈哈纯净水)，d管(0.4μM罗丹明B20μL，13nm的金纳米粒子200μL，780μL娃哈哈纯净水)，然后将混合物在25℃下培养10min，测荧光吸收光谱。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述金纳米粒子对罗丹明B的荧光猝灭作用方法检测盐酸克伦特罗的步骤如下：

向含有200μL13nm金纳米粒子(6.62nM,pH=6.5)的体系中，分别加入不同浓度的盐酸克伦特罗标准溶液，室温反应10min后，在体系中加入20μL0.4μM的罗丹明B，罗丹明B的荧光强度抑制程度将随着盐酸克伦特罗浓度的不同而不同。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述实际样品的检测是取仔猪饲料进行的：称取1g饲料加入25mL离心管中，加入3mL丙酮和1mol/L氢氧化钠混合溶液(体积比为9:1)，超声5min，混合样品在10000r，5℃离心10min，重复3次，收集上清液，旋转蒸发至干，溶解在1mL娃哈哈纯净水中，再加入1mL正己烷除去脂肪，5℃，10000r离心5min，剩余的水溶液用于分析；分析中，将提取的水溶液稀释20倍，等分为10份，如权利要求5所述的方法，加入不同浓度的盐酸克伦特罗标准溶液进行测定；根据[(F₀-F)/F₀]与盐酸克伦特罗的浓度建立标准曲线，盐酸克伦特罗的检出限为3.96×10^-3μg/mL，线性范围为0.2μg/mL-1.8μg/mL。