[发明专利]棉花的内生真菌CEF-642及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物病理学，具体地涉及棉花内生真菌CEF-642及其应用。

背景技术

棉花黄萎病（Verticillium Wilt）是影响世界各大产棉区棉花(Gossypium hirsutum L.)优质高产的首要病害，在我国，年发生面积达4500万亩，产量损失在10%～35%，年直接经济损失约23亿人民币，已经成为发展我国棉花生产的主要障碍。由于棉花黄萎病是一种全生育期的土传维管束病害，利用化学药剂进行黄萎病防治效果差，且对环境不友好。

生物防治是利用一种或多种生物或其代谢产物来降低植物病原物的数量或抑制其致病能力而减轻植物病害的一类措施。防治的主体集中在有益微生物，用来对抗植物病原菌的生长定殖。生物防治不仅能减少化学农药的使用，减轻其造成的环境污染，而且具有效果稳定、防效持久、对环境中有益微生物无影响等优点，是现代可持续农业系统中的重要组成部分。目前防治土传病害的主要方法是培育抗病品种、使用化学药剂和利用农业措施等，但防病效果都不理想。因此，以生物防治为主导的综合防治措施的研究，尤其对土传病害的防治具有非常重要的意义。

植物内生菌是继从土壤微生物中寻找抗菌物质后的另一类待开发的微生物类群。一些来源于植物的内生真菌越来越受到研究者的青睐，有研究表明部分内生真菌的天然代谢产物有抑制和杀灭许多病原微生物的作用，这些微生物包括感染人和动物的细菌、真菌、病毒等病原体以及植物病原菌等。但是在棉花中有关内生真菌的研究还处于初级阶段，特别是其生防潜能的研究鲜见报道。

本发明从棉花内生真菌入手，通过室内抑菌试验和温室接种试验综合评估，筛选对黄萎病菌具有较高抑制活性的菌株，获得对该病控制效果好的生防菌株CEF-642。在温室试验中，用稀释4倍的CEF-642培养滤液浸泡棉种12h，对棉花黄萎病的防治效果达75.0%，说明该内生真菌对黄萎病的防治具备巨大潜能。并且本发明采用滤液浸种，操作简单，防效稳定，推广性强。

发明内容

本发明的发明人为开发棉花内生真菌的生防潜力，评估其对棉花生产上的主要病害--黄萎病发生的控制能力，完成本发明。

本发明从棉花的内生真菌入手，通过分离、鉴定、室内筛选、温室的防效测定，获得对棉花黄萎病具有显著控制作用的菌株CEF-642（Talaromyces flavus），其保藏编号为：CGMCC No.8303。

该菌株是一株棉花的内生真菌，由于其对棉花不致病、无毒害作用。因此在分离时，首先要选择健康的棉株，对分离组织进行彻底的表面消毒，确保分离到的是棉花的内生真菌。

选用了传统形态学鉴定和分子生物学鉴定相结合的方法，得知该棉花内生真菌菌株是一株黄色蠕形霉。

植物内生真菌是一类可以生活于健康植物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的一类真菌，由于植物内生真菌在植物体内具有自主繁殖和传递的特性，生存状态稳定，不易受外界环境影响，因此可以与寄主植物长期共存、协同进化。此外，内生真菌具降解农药的潜能，可提高农田生态系统的生物多样性，维持生态平衡。因此来源于棉花健康叶部的内生真菌CEF-642可以在棉花体内大量定殖和生长，从而能够有效的抵御棉花黄萎病菌在维管束内的繁殖、扩展和蔓延。由于CEF-642的挥发性和非挥发性代谢产物均可以显著抑制棉花黄萎病菌菌丝的生长，尤其是非挥发性代谢产物可以完全抑制黄萎菌的生长，本发明选用了培养滤液浸种法和培养物玉米沙子基质育苗法来评估内生菌CEF-642对黄萎病的控制作用。综合考虑防治效果和可操作性，本发明推荐使用CEF-642培养滤液浸种法防治黄萎病。

利用棉花的内生真菌CEF-642来控制棉花黄萎病在以下三方面产生有益效果。

1、CEF-642能够在人工培养基上培养，对培养条件要求宽泛，10-30℃均可生长，该菌株在PDA、查氏及玉米沙粒培养基上生长良好，有利于大量繁殖和推广应用。此外，黄色蠕形霉在土壤中也普遍存在，可以广泛定殖。

2、在室内试验中，CEF-642对棉花黄萎病菌具有较好的抑制效果。在PDA培养基上，CEF-642和棉花黄萎病菌对峙培养时，对黄萎病菌抑菌效果达到83.8%；挥发性代谢产物对黄萎病菌的抑菌率为81.6%；非挥发性代谢产物可以完全抑制黄萎病菌的生长。