[发明专利]一种检测多子小瓜子的引物、试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种用于检测多子小瓜子的引物，其特征在于，所述引物序列为由SEQ ID NO:1-4的4条序列组成。

2.一种用于检测多子小瓜子的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物。

3.一种用于检测多子小瓜子的方法，其特征在于，所述方法应用了权利要求1的引物或者权利要求2的试剂盒。

4.权利要求3的检测多子小瓜子的方法，其特征在于，包括如下步骤，

提取DNA模板；

LAMP PCR扩增：应用权利要求1的引物或者权利要求2 的试剂盒进行扩增；

结果判断。

5.权利要求4的检测多子小瓜子的方法，其特征在于，所述提取DNA模板可以从鱼鳍、鱼鳃、鱼体表刮取物、饲养水体离心收集沉淀等物中提取。

6.权利要求4的检测多子小瓜子的方法，其特征在于，所述的LAMP PCR扩增体系为，SEQ ID NO:1-2的序列各0. 8 μmol/L，SEQ ID NO:3-4的序列各0.2 μmol/L，I U DNA 模板，1.2 mmol/L dNTP，1 mol/L甜菜碱，8U Bsm DNA 聚合酶，1×Bsm buffer，加灭菌双蒸馏水补全到25 μl。

7.权利要求4的检测多子小瓜子的方法，其特征在于，所述的LAMP PCR扩增程序为，95℃保温5 min ，60 ℃保温1 h，80 ℃保温5 min。

8.权利要求4的检测多子小瓜子的方法，其特征在于，所述的结果判断为加入显色剂，轻晃混匀，反应液呈浅黄色的为阳性结果，反应液呈橙黄色的为阴性结果。

9.权利要求8的检测多子小瓜子的方法，其特征在于，所述显色剂为SYBR green I。