[发明专利]用于黄颡鱼及乌鳢超雄鱼及全雄鱼开发的后裔测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及水产动物遗传育种领域，确切地说是指一种用于黄颡鱼及乌鳢超雄鱼及全雄鱼开发的后裔测定方法。

背景技术

在水产养殖中，许多养殖种类雌雄个体之间的经济性状，如生长速度、个体大小及可食（药用）部位大小等存在差异。因此，通过控制性别的方法生产单一性别的苗种用于养殖能够显著提升经济效益。如黄颡鱼或乌鳢，雄鱼比雌鱼生长速度要快，最终个体要大，因此养殖过程选择全雄性或雄性比例占大多数的苗种能够显著增加养殖效益。

目前培育单性苗种的常规方法主要包括激素投喂法、远缘杂交、人工雌核发育和超雄（超雌）三系配套法。激素直接投喂法即在养殖动物性别分化之前透过在饵料当中添加性激素达到控制性别的方法，该方法在很多鱼类当中有效，但在虾蟹等甲壳类当中效果不甚理想，且存在食品安全的隐患，在生产当中应用不多。远缘杂交技术控制性别是杂技育种的一个重要利用方面，许多鱼类的种间、属间或科间杂交能够产生单一性别或性腺败育的后代，如用奥利亚罗非鱼雄性和尼罗罗非鱼雌性杂交所繁殖后代为全雄性。人工雌核发育技术即通过人为用紫外线或其它高能射线处理精子，使精子遗传失活，使其与卵子受精后仅起到激活卵子而不参与胚胎的后续发育的技术。对于雌性配子同型的水产动物来说，诱导雌核发育能够获得全雌性后代，如异育银鲫。三系配套法指对于性别决定机制为XX-XY或ZW-ZZ型的雌性异型或雄性异型动物，通过原系构建性别转化系（即遗传性别和生理性别相反的系），再通过转化系和原系交配获得遗传纯系超雄或超雌性动物，从而在生产上利用这些超雄性或超雌性动物与原系交配获得大量全雄性或全雌性后代的育种方法。

但是在传统的XX-XY型性别决定机制动物中，开发全雄性苗种所采用的三系配套技术当中，XY型雌性转化系的筛选和鉴别通常采用的是XY型自然雄性个体，即XX型和XY型雌性的区分需要利用其与XY型自然雄性个体繁殖后代性别比例的不同来实现。理论上，XX型雌性和XY型雄性繁育后代雌性比例为1:1，而XY型雌性和XY雄雄性繁育后代性别比例为1:3，据此进行亲本基因型的区分。但在实际育种操作过程当中，由于受到培育条件、取样数量及鱼苗培育过程伴随的残杀等现象的发生，造成取样群体性别比例严重偏离理论比例，从而使得这种需要严格依据后代性别比例进行亲本基因型区分的方法其判定结果存在很大的不确定性。

发明内容

针对上述缺陷，本发明解决的技术问题在于提供一种用于黄颡鱼及乌鳢超雄鱼及全雄鱼开发的后裔测定方法，作简单，效率高，育种风险低，克服了传统上开发XX-XY基因型养殖动物全雄苗种的不确定性，能够显著提高测交效率，减少统计困难。

为了解决以上的技术问题，本发明提供的用于黄颡鱼及乌鳢超雄鱼及全雄鱼开发的后裔测定方法，包括如下步骤：

（1）黄颡鱼、乌鳢的激素控制性别：经组织学切片观察，黄颡鱼及乌鳢性别分化出现在孵化后第11-15天，在鱼苗孵化后第5天开始，采用30ppm甲基睾丸酮和50ppm氟他胺或30ppm雌酮和50ppm枸橼酸他莫昔芬处理的饲料，连续投喂30天可获得雌性或雄性比例在90%以上的后代；

（2）测交筛选伪雄性：利用自然雌性XX个体对雄性化性逆转的候选群体雄性进行一配一交配，隔离饲养至10cm-15cm时进行性腺压片检测，统计后代性别比例，其中后代全部为雌性或雄性个体比例低于5%的可判定为XX型雄鱼；

（3）全雌性群体及伪雌性群体获得：利用筛选到的伪雄性与正常雌性繁殖可获得全雌性群体，取其中部分进行雄性化逆转，所获得的雄性个体全部为伪雄性；

（4）利用伪雄性测交筛选伪雌性：利用构建的大量伪雄性群体与雌性化性逆转的候选群体雌性进行一配一交配，隔离饲养至10cm-15cm时进行性腺压片检测，统计后代性别比例，其中后代全部为雌性或雄性个体比例低于5%的可判定为XX型雌性鱼，后代雄性率超过30%的可判定为XY型雌性鱼；

（5）利用全雌性种群测交筛选YY雄性及雌性构建超雄系：利用筛选获得伪雌性个体与正常雄性个体繁殖，后代分为两部分，一部分正常养殖，一部分进行雌性化性逆转；利用XX雌性与上述正常培育获得雄性一配一交配，根据后代性别比例筛选YY雄性；利用XX雄性与上述雌性化性逆转获得雌性进行一配一交配，根据后代性别比例筛选获得YY雌性。利用筛选获得YY雄性及YY雌性交配可获得大量YY型后代，部分继续进行雌性化性逆转可大量获得YY雌性，构建成功YY繁育系，其余部分可正常用于全雄性苗种繁育。

优选地，步骤（3）中，伪雄性个体除用于全雌性群体的繁育外，还用于后续测交操作。