[发明专利]转基因玉米MIR604结构特异定量PCR精准检测的引物和探针及方法

权利要求书

1.转基因玉米MIR604结构特异性定量PCR精准检测的引物和探针，其特征在于,

上游引物序列，MIR604ConF：5'-GACGACTTGTTTCATTGATTCTTCA-3'；

下游引物序列，MIR604ConR：5'- GGGCCTCGGTGTTGTTGTC -3'；

荧光探针序列，MIR604ConP：5'-FAM-ATCGAGCTTCTTTTGCACCA-TAMRA-3'。

2.转基因玉米MIR604结构特异性定量PCR精准检测方法，其特征在于,包括以下步骤：

（1）合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物序列，MIR604ConF：5'-GACGACTTGTTTCATTGATTCTTCA-3'

下游引物序列，MIR604ConR：5'- GGGCCTCGGTGTTGTTGTC -3'

荧光探针序列，MIR604ConP：5'-FAM-ATCGAGCTTCTTTTGCACCA-TAMRA-3'；

（2）制备MIR604品系的DNA稀释液；

（3）配制PCR反应体系；

（4）定量PCR检测。

3.根据权利要求2所述的转基因玉米MIR604结构特异性定量PCR精准检测方法，其特征在于，步骤（1）所述合成的引物及荧光探针的浓度均为10μmol/l，步骤（2）所述制备的DNA稀释液的浓度为50ng/μl。

4.根据权利要求3所述的转基因玉米MIR604结构特异定量PCR精准检测方法，其特征在于，步骤（3）所述的配制PCR反应体系，即将4μl的DNA稀释液加入到20μl反应体系中，所述20μl的反应体系包括以下组分：

Taqman Master mix（2×）                 10μl

上游引物                                 1μl

下游引物                                 1μl

荧光探针                                 0.5μl

DNA稀释液                                4.0μl

水                                       3.5μl。

5.根据权利要求2或4所述的转基因玉米MIR604结构特异性定量PCR精准检测方法，其特征在于，所述PCR反应条件为：95℃预变性10min，1个循环；95℃变性15s，59℃退火60s，45个循环。