[发明专利]牛Asia1/O型口蹄疫双价多表位疫苗及其制备方法和应用有效
申请号: | 201410093058.5 | 申请日: | 2014-03-13 |
公开(公告)号: | CN103897065A | 公开(公告)日: | 2014-07-02 |
发明(设计)人: | 邵军军;常惠芸 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/135;A61K48/00;A61P31/14 |
代理公司: | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人: | 孙皓晨;费碧华 |
地址: | 730046 甘肃*** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | asia1 口蹄疫 双价多表位 疫苗 及其 制备 方法 应用 | ||
技术领域
本发明涉及一种牛口蹄疫病毒重组抗原及其制备方法和应用,特别涉及一种牛Asia1/O型口蹄疫双价多表位疫苗及其制备方法和应用,本发明属于兽用生物疫苗领域。
背景技术
口蹄疫作为感染主要经济畜种猪、牛和羊的重大动物疫病不仅严重威胁畜牧业的健康发展,而且涉及动物源性食品安全以及其外贸出口。一旦发生疫情将损失惨重,政治影响恶劣。灭活疫苗在防控FMD疫情中发挥着十分重要的作用,但由于生产此类疫苗需要建设防止病原体逃逸的高级别生物安全生产车间,区分疫苗免疫和自然感染动物(DIVA)。更为严重的是病毒灭活不完全有引起疫苗毒株流行的危险。另外,口蹄疫病毒不仅血清型众多,而且具有高度的遗传变异能力,具有准种属性。值得一提的是每个血清型之间无交叉免疫保护,病原的这种属性要求针对每个血清型要研制与其相对应的高效疫苗,这增加了口蹄疫防控的难度,也增加了经费支出。因此,研制高效、安全的多价新型疫苗用于口蹄疫的防控已刻不容缓。
采用分子生物学,蛋白组学以及反向疫苗学等相关技术研制安全、高效的FMD多价新型疫苗已成为可能。尽管已经有多项关于口蹄疫新型疫苗的专利获批,包括上海复旦大学郑赵鑫教授研制的猪O型口蹄疫病毒重组疫苗,本实验室研制的牛Asia1型口蹄疫重组多表位疫苗(专利号:ZL200910259363.6),羊Asia1型口蹄疫重组多表位疫苗(专利号:ZL200910224025.9),猪口蹄疫病毒O型广谱多表位重组抗原及其应用(专利号:ZL201210130997.3)。这些都是针对单一血清型的疫苗,不能提供交叉免疫保护。一方面本发明为了实现“一针防多病”的目的,本着既降低免疫成本,又同时防控2种病原的效果,本发明以已研制的口蹄疫多表位疫苗为基础,采用分子生物学技术以及先进的设计理念,针对我国牛O型和Asia1型2个主要血清型的口蹄疫病毒毒株的主要抗原表位序列,研制了牛Asia1/O口蹄疫双价广谱多表位疫苗,以期从根本上解决目前口蹄疫疫苗只针对一个血清型的局限性,另一方面,本发明在通过进一步的深入研究对抗原表位序列进行了进一步的优化,在原有基础上提高了抗原表位的免疫原性,且双价疫苗之间的抗原并不互相干扰,进一步提高了由其制备得到的双价多表位疫苗的免疫保护效力,本发明的提出对控制和净化我国牛Asia1型和O型2个血清型的口蹄疫具有重要的意义,也为研制更多效价的口蹄疫新型疫苗具有借鉴意义。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种牛Asia1/O型口蹄疫病毒复合多表位重组抗原,该抗原复合了我国流行的牛O型和Asia1型口蹄疫病毒代表性毒株的优势抗原表位;
本发明的目的之二在于提供所述多表位重组抗原在制备牛Asia1/O型口蹄疫双价多表位疫苗;
本发明的目的之三在于提供一种牛Asia1/O型口蹄疫双价多表位疫苗,含有本发明所述的牛Asia1/O型口蹄疫病毒复合多表位重组抗原。
为了达到所述目的,本发明采用了以下技术方案:
本发明采用全新的反向疫苗操作学技术和策略,将我国流行的牛O型和Asia1型口蹄疫病毒代表性毒株的优势抗原表位进行优化和合理的串联后,并与进行优化的牛IgG免疫刺激片断(IgG重链恒定区)偶联,克隆入原核表达质粒如pET-30a(+)中构建重组表达质粒,转化BL21(DE3)表达重组抗原并采用Ni-NAT层析柱纯化后,经Bio-Rad蛋白定量试剂盒定量后发现经过以上优化后获得的重组抗原量明显增加,将其单独或与重组口蹄疫病毒3D蛋白配伍制备疫苗,动物免疫试验结果显示,该疫苗配伍能够刺激机体同时产生针对2个血清型的高效价的保护性抗体,也证实了本发明采用全新设计研究的双价疫苗之间的抗原并不互相干扰,能达到“一针防多病”的目的,具有良好的应用前景。
本发明的一种牛Asia1/O型口蹄疫病毒复合多表位重组抗原,其特征在于所述的重组抗原是将我国流行的牛O型和Asia1型口蹄疫病毒代表性毒株的优势抗原表位进行串联后与牛IgG重链恒定区偶联得到的,其中,牛O型口蹄疫病毒代表性毒株的优势抗原表位的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,牛Asia1型口蹄疫病毒代表性毒株的优势抗原表位的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,牛IgG重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
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