[发明专利]尿毒症外周血单个核细胞超保守区域转录表达基因模型的构建方法与应用

权利要求书

1.尿毒症外周血单个核细胞超保守区域转录表达基因模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，设置尿毒症组与正常对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的全血标本，分别分离得到外周血单个核细胞；

S2，测定标本核糖核酸的含量、质量与完整性，确定可用，则执行下一步骤；

S3，采用超保守区域转录子芯片分析人体超保守区域转录子表达水平，检测基因特异性探针标记的超保守区域基因；

S4，进行核糖核酸标记和芯片杂交；

S5，采用特征提取方法，分析获得的芯片扫描结果；

S6，采用倍数变化方法过滤鉴定差异表达的潜在的超保守区域转录子及与其重叠超保守区域的核糖核酸转录子；

S7，比较所述尿毒症组与所述正常对照组中各标本间的倍数变化，筛选出表达差异的核糖核酸；

S8、选取表达差异超过预设差异阈值的核糖核酸构建基因模型。

2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，步骤S2中，采用全波长超微量分光光度计测定标本核糖核酸的含量与质量，采用琼脂凝胶电泳方法评估标本核糖核酸的完整性。

3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，步骤S3中，在各超保守区域基因的两端分别添加1kb的片段，然后用40bp的特异性探针标记。

4.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于，步骤S4中，采用单色芯片基底基因表达分析方案进行核糖核酸标记和芯片杂交。

5.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，步骤S5中，过滤低强度表达的探针，将原始信号探针的强度进行归一化。

6.根据权利要求5所述构建方法，其特征在于，步骤S7中，设置所述倍数变化的阈值≥2.0。

7.根据权利要求6所述构建方法，其特征在于，步骤S8中，所述基因模型中，包括若干超保守区域转录子，并且，各所述超保守区域转录子均为外显子。

8.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于，所述基因模型中，包括表达上调的21个超保守区域转录子以及表达下调的49个超保守区域转录子；其中，

表达上调的21个超保守区域转录子包括uc.111+、uc.16-、uc.162+、uc.166-、uc.189+、uc.208-、uc.209-、uc.221-、uc.234+、uc.285+、uc.290-、uc.324-、uc.33+、uc.341+、uc.342+、uc.455-、uc.477+、uc.61-、uc.77-、uc.90+以及uc.95+；

表达下调的49个超保守区域转录子包括uc.101-、uc.102-、uc.138-、uc.141-、uc.144-、uc.151-、uc.166-、uc.173+、uc.185-、uc.186-、uc.203+、uc.208-、uc.209-、uc.210-、uc.233+、uc.266+、uc.267+、uc.268-、uc.276+、uc.280+、uc.28+、uc.282+、uc.313-、uc.338+、uc.341+、uc.356+、uc.36+、uc.414-、uc.418-、uc.419-、uc.419+、uc.420-、uc.45-、uc.46-、uc.453-、uc.454-、uc.455-、uc.456+、uc.457-、uc.46-、uc.475+、uc.477+、uc.50-、uc.61+、uc.63-、uc.77-、uc.84-、uc.89+以及uc.97+。

9.采用如权利要求1至8任一所述构建方法所得到的尿毒症外周血单个核细胞超保守区域转录表达基因模型在获取尿毒症标志物的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述基因模型包括基因RBFOX2。