[发明专利]用于肺癌早中期快速诊断试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及癌症诊断检测用的试剂盒领域，具体为一种用于肺癌早中期快速诊断试剂盒及其检测方法。

背景技术：

肺癌是全球范围内死亡率最高的癌症。这种癌症治疗困难，转移的肺癌尤其难治。大约有75%的肺癌患者在确诊时已经为转移性或晚期，其5年生存率仅为6%。过去数十年来,虽然化疗、放疗和手术等治疗措施有了快速的发展,但肺癌的5年生存率仍然较低。主要是因为还没有一种安全的方法可以对其进行筛选，在疾病的早期——治疗的最佳时机，就及时发现患者罹患肺癌的可能性微乎其微。

目前迫切需要一种有效的筛选策略。当CT扫描不清楚，血液测试能帮助医生做出更好的判断。对无症状患者采用CT扫描进行筛选，既昂贵又危险。这种筛选有很高的假阳性，其中一些患者将接受不必要的肺部活组织检查。

肿瘤标志物(tumor markers，TM)是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放，或由机体对肿瘤细胞反应而产生的标志肿瘤存在和生长的一类物质。这些物质在正常成人中不存在或者是在癌症患者中出现的水平显著高于正常人。目前肿瘤标志物检测技术被认为是早期发现无症状微灶肿瘤的唯一途径，这一检测技术可先于X光片、超声、CT、MRI或PET-CT等物理检查发现肿瘤。可用于高危人群恶性肿瘤的筛查，肿瘤诊断与鉴别诊断，评估治疗的效果，预测或监视肿瘤复发或转移。目前，医院出现的肺癌诊断试剂盒都是检测一些常见的肿瘤标记物，灵敏性及准确性都偏低。因主要是选定的肿瘤标记物单项检测往往有很大的局限性，难以满足早期快速诊断的要求。

目前，市场上还没有针对肺癌的快速高效诊断试剂盒问世，严重影响到肺癌早期发现及治疗。

发明内容：

本发明的目的是针对以上述现有肺癌诊断存在的不足，提供一种灵敏度高、准确性强且使用方便高效的用于肺癌早中期快速诊断试剂盒。

本发明另一目的是提供一种用于肺癌早中期快速诊断试剂盒的检测方法。

为了实现本发明目的，本发明采取的技术方案是：用于肺癌早中期快速诊断试剂盒，包括捕获抗体，所述捕获抗体包括半乳糖凝集素和细胞角质素片段抗原21-1（CYFRA21-1）分别制得的单克隆抗体。

所述捕获抗体还包括人类天冬胺酰基β－羟化酶（HAAH）制得的单克隆抗体。

所述试剂盒还包括检测抗体，所述检测抗体包括半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21-1(CYFRA21-1)和人类天冬胺酰基β－羟化酶（HAAH）分别制得的HRP标记后的多克隆抗体。

所述捕获抗体为将半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21-1(CYFRA21-1)和人类天冬胺酰基β－羟化酶（HAAH）克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到相应的抗原，将所述抗原免疫哺乳动物得到的相应单克隆抗体。

所述捕获抗体的制备方法包括的步骤如下：

（1）抗原的制备：把半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21-1及人类天冬胺酰基β－羟化酶的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到抗原，此抗原也可作为标准品用；

（2）捕获抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物，得到相应的单克隆抗体为捕获抗体。

所述检测抗体为将半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21-1(CYFRA21-1)和人类天冬胺酰基β－羟化酶（HAAH）克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到相应的抗原，将所述抗原免疫哺乳动物得到的相应多克隆抗体，对所述多克隆抗体进行HRP标记。

所述检测抗体的制备方法包括的步骤如下：

（1）抗原的制备：把半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21-1及人类天冬胺酰基β－羟化酶的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到抗原，此抗原也可作为标准品用；

（2）检测抗体的制备：将上述抗原免疫哺乳动物，得到相应的多克隆抗体为检测抗体；

（3）HRP标记：对所述多克隆抗体进行HRP标记。

所述半乳糖凝集素优选半乳糖凝集素-3和半乳糖凝集素-8。

所述捕获抗体预先包被于微量滴定板的孔内，可以简化步骤，提高检测效率。

用于肺癌早中期快速诊断试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：

（1）抗原的制备：将半乳糖凝集素、细胞角质素片段抗原21-1及人类天冬胺酰基β－羟化酶的基因克隆到真核表达载体，并在哺乳动物细胞中实现蛋白的表达，纯化后得到所需的抗原，其中，所述抗原也可作为标准品用。