[发明专利]针对于载脂蛋白A1的单域抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，涉及针对于载脂蛋白A1的单域抗体。

背景技术

载脂蛋白在脂蛋白代谢中具有重要的生理功能。载脂蛋白主要分A、B、C、D、E五类，主要在肝(部分在小肠)合成，是构成血浆脂蛋白的重要组分。载脂蛋白A1水平受性别、种族、年龄、体质指数、酒精摄入量、激素、吸烟等因素影响。研究结果显示载脂蛋白A1可以结合周围组织游离胆固醇，促进动脉壁细胞中胆固醇的清除，加速肝脏内胆固醇代谢。所以，载脂蛋白A与高密度脂蛋白的临床意义相同，它与冠心病、动脉粥样硬化呈负相关，即它升高有利于预防冠心病；而降低可出现低高密度脂蛋白血症，易诱发动脉硬化和冠心病。

对于ApoA1的测定，现广泛采用免疫透射比浊法；此法简便快速，便于大批量样本测定，而这种检测方法是基于将载脂蛋白A1免疫绵羊获得的多抗来实现的。但是这种传统意义上的抗体稳定性差、灵敏度低、生产成本高，所有因素均限制了对于载脂蛋白A1的检测。1993年比利时科学家首次在Nature报道：在骆驼血液中的抗体，有一半没有轻链，而且更让人惊喜的是，这些缺失轻链的“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧密结合，另外不像scFv那样互相沾粘，甚至聚集成块。这种抗体只包含一个重链可变区和两个常规的CH2与CH3区，更重要的是单独克隆并表达出来的VHH区具有很好的结构稳定性与抗原结合活性，分子量只是普通抗体的1/10，所以VHH也称Nanobody（单域抗体）；与此同时单域抗体化学性质也更加灵活，稳定性好，可溶性高，表达容易且利用微生物即可大量的获得，容易偶联其他分子，因此应用单域抗体为研发载脂蛋白A1检测试剂具有广阔的前景。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供针对载脂蛋白A1的单域抗体，同时提供该单域抗体的编码序列及该单域抗体在制备检测的应用。

技术方案：为实现上述目的，本发明的第一方面，提供了一种载脂蛋白A1的单域抗体，包括框架区FR和互补决定区CDR，所述框架区FR选自下组的FR的氨基酸序列中任意一种：SEQ ID NO：1所示的FR1，SEQ ID NO：2所示的FR2，SEQ ID NO：3所示的FR3，SEQ ID NO：4所示的FR4；或SEQ ID NO：5所示的FR1，SEQ ID NO：6所示的FR2，SEQ ID NO：7所示的FR3，SEQ ID NO：8所示的FR4；

所述互补决定区CDR选自下组的CDR的氨基酸序列中任意一种：

SEQ ID NO：9所示的CDR1，SEQ ID NO：10所示的CDR2，SEQ ID NO：11所示的CDR3；或SEQ ID NO：12所示的CDR1，SEQ ID NO：13所示的CDR2，SEQ ID NO：14所示的CDR3；

优选地，所述的载脂蛋白A1的单域抗体的VHH链，它具有SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列。

本发明第二方面，一种载脂蛋白A1单域抗体，它针对载脂蛋白A1表位的单域抗体，包括两条具有SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示氨基酸序列的VHH链。

本发明第三方面，提供了一种DNA分子，它编码选自下组的蛋白质：本发明所述的载脂蛋白A1的单域抗体的VHH链，或本发明所述的载脂蛋白A1单域抗体。

优选地，所述的DNA分子，其特征在于，它具有选自下组的DNA序列：

SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18

本发明的第四方面，提供了一种表达载体，它含SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18所示的核苷酸序列。

本发明的第五方面，提供了一种宿主细胞，其特征在于，它含有所述的表达载体。

本发明的第六方面，提供了本发明所述的载脂蛋白A1单域抗体用于检测载脂蛋白A1的用途。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点如下：本发明将血液中提取的载脂蛋白A1免疫新疆单峰驼，随后利用该骆驼外周血淋巴细胞建立了针对于载脂蛋白A1的单域抗体基因库，试验中将载脂蛋白A1偶联在酶标板上，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫性的单域抗体基因库（骆驼重链抗体噬菌体展示基因库），从而获得了针对载脂蛋白A1特异性的单域抗体基因，将此基因转至大肠杆菌中，从而建立了能在大肠杆菌中高效表达的单域抗体株。

附图说明

图1是单域抗体的基因电泳图；其中泳道1是DNA分子标准，泳道2是PCR扩增重链抗体可变区片段。

图2是构建单域抗体的噬菌体展示文库时，文库库容测定图。