[发明专利]马铃薯X病毒弱毒株系的筛选及在交叉保护中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物病毒基因工程领域，具体地，本发明涉及马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）弱毒株系的筛选及其在交叉保护中的应用。

背景技术

病毒病是作物上的重要病害，给农业生产造成巨大损失。由于作物病毒病种类多，传播途径复杂，生产上没有免疫或高抗病毒病的品种，市场上又没有对病毒病特效的药剂，因而病毒病的防治非常困难。

交叉保护是指植株受弱毒株系侵染后，免受后继的病毒强毒株系侵染的现象，已经在许多作物病毒病的防治中取得了成功。限制交叉保护广泛应用的关键因素是可用的弱毒株系太少。

马铃薯X病毒（PVX）属于马铃薯X病毒属（Potexvirus），主要侵染烟草、番茄、马铃薯等茄科作物，是这些作物上的主要病毒之一。PVX与马铃薯Y病毒属病毒间有协生作用，一旦复合侵染会引起严重症状，造成更大损失。

目前，关于PVX株系划分的研究较多，但是关于PVX弱毒株系中的研究很少。本发明通过定点突变技术，获得了4个新的致病力显著降低的PVX弱毒株系，攻毒实验证明，弱毒株系E1001A可以有效控制PVX强毒株系的侵染。

发明内容

本发明提供了一种PVX弱毒株系的筛选及应用，以PVX的侵染性克隆为基础，通过定点突变技术在PVX的基因中定点引入突变，明确了调控PVX致病力的氨基酸位点，获得了致病力显著下降的PVX弱毒突变体。通过测定弱毒株系对强毒株系的交叉保护效果，获得了能有效保护植株免受PVX强毒株系侵染的弱毒株系。

本发明实施的具体技术方案是：

a.突变体的获得：以自主构建的马铃薯X病毒的侵染性克隆为基础，针对其聚合酶第46位、863位、968位和1001位氨基酸设计突变引物，利用QuickChange^TM定点突变试剂盒在这些位点引入突变。

b.弱毒株系的筛选：通过农杆菌浸润法将a中获得的突变体接种到寄主植物本氏烟，观察这些突变体所致症状的变化，筛选致病力明显降低的突变体。

c.交叉保护效果测定：在接种弱毒株系后10天和15天接种PVX强毒株系，观察弱毒株系对强毒株系的交叉保护效果。

采用本发明所述的技术方案，可以获得如下的技术效果：

1）获得了4个致病力明显降低的PVX弱毒株系。

2）弱毒株系E1001A可有效保护植株免受PVX强毒株系的侵染。

附图说明

图1为PVX强毒株系和弱毒突变体接种后第6天的症状；

图2显示PVX强毒株系和弱毒突变体接种后10天在烟草中的积累水平；

图3显示间隔期为10天时，不同弱毒株系在挑战接种后15天对烟草植株的保护效果；

图4为不同处理的烟草植株内病毒的积累水平。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

本发明所提供的实施例，均按照常规实验条件，其中所采用的引物序列如下表：