[发明专利]一种以川明参渣提取蛋白质的有效方法

说明书

技术领域                                                                                        

本发明涉及一种采用超声波辅助碱提酸沉法从川明参渣中高效提取川明参蛋白的方法。

背景技术

川明参又名明参、明沙参、土明参，是伞形科(Umbelliferae)植物川明参属 “chuanminshen violaceum Sheh et Shan”的根，是我国特有的单种属植物，是四川产道地药材。分布区地处亚热带湿润性季风气候带之中，海拔200~1000m，北纬29°~32°，东经105°~112°。主产区为四川（青北江、金堂、简阳、苍溪、威远、北川、平武、巴中、南川）、湖北（宜昌、当阳）等地。具有滋阴补肺，健脾等功效，主治热病伤阴，肺热咳嗽，脾虚食少，病后体弱。川明参中含有多糖、蛋白质、多肽、氨基酸、香豆素、萜类、甾醇、类脂、苷类、游离有机物或酚性化合物和鞣质等成分。现代医学研究表明，川明参的药效成分主要分布于乙醇提取物中，目前国内外对川明参药效成分的研究也大多集中于乙醇提取物及其不同极性的萃取物的研究，而乙醇提取物中几乎不含蛋白和多糖，因此几乎全部的蛋白质随残渣一起被废弃，造成蛋白资源的浪费。已有研究表明川明参中粗蛋白含量高达5%以上，其水解氨基酸总含量超过3%，各类氨基酸达13 种以上。其中人体必需的8种氨基酸，占总氨基酸含量的40%以上，它们可能是川明参的功能成分之一，但目前关于利用川明参渣提取蛋白的研究较少。以川明参渣为原料提取蛋白的技术有利于川明参资源进一步开发利用。 

我国工业提取分离蛋白质主要采用碱提酸沉的方法，目前除了研究更多新的分离方法外，各种辅助分离技术逐渐受到人们的重视，超声波在化学领域的广泛应用使其在应用于各种组分分离中显示了许多突出优势。本发明在碱提酸沉法的基础上，采用超声波辅助提取，并对川明参渣中蛋白的提取工艺进行优化，最终确定最佳工艺条件。 

发明内容

为解决以上技术问题，本发明提供一种简单、高效的从川明参渣中提取蛋白的有效方法。 

本发明采用以下技术方案来实现：                         

在碱提酸沉的基础上采用超声波辅助法方法从川明参中提取川明参蛋白。

本发明川明参蛋白的制备方法如下： 

将乙醇提取后的川明参渣60℃干燥至恒重，粉碎。取适量上述川明参粉，碱溶均匀，超声提取，离心，二次超声提取，合并上清液，酸沉，离心，取沉淀物，醇洗，水洗，真空冷冻干燥，得川明参蛋白粉。

本发明优选的川明参蛋白制备条件为： 

川明参粉按液料比24:1加碱溶液（用氢氧化钠调pH12.5），超声提取，离心，二次超声提取，合并上清液，用盐酸调pH至2.0沉淀蛋白，离心，取沉淀物，用95%乙醇洗涤2次，再用超纯水洗，调pH7.0，300Pa，-70℃冷冻干燥，川明参蛋白粉。

超声波辅助提取川明参蛋白的最佳条件为：超声功率185W，超声温度34℃，超声时间31min，液料比24:1。 

川明参渣总蛋白含量的测定：采用微量凯氏定氮法（食品安全国家标准食品中蛋白质的测定，GB5009.5-2010）测定川明参总蛋白的含量为4.24%。 

川明参可溶性蛋白含量的测定：以牛血清蛋白为标准品，采用考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白质含量。以牛血清蛋白浓度（μg/mL）为横坐标（x），吸光度A为纵坐标（y）绘制浓度-吸光度标准曲线。得到标准曲线方程：y=0.0054x+0.0075，R²=0.9990。将超声辅助所得提取液稀释至一定体积，取稀释液1.0mL，加5.0mL考马斯亮蓝G-250溶液，振荡摇匀，在595nm处，以提取剂为对照，测定吸光值，通过标准曲线获得样品蛋白质浓度，并计算出在该条件下的蛋白提取率。计算可溶性蛋白提取率公式： 

采用本发明所述的方法，川明参蛋白的提取率高达54.62%左右。本方法具有提取时间短，操作简单，生产成本低的优点。

注：本发明所提川明参蛋白均为可溶性蛋白。 

附图说明

图1不同提取剂对川明参蛋白提取率的影响 

图2碱液 pH对川明参蛋白提取率的影响

图3超声功率对川明参蛋白提取率的影响

图4超声温度对川明参蛋白提取率的影响

图5超声时间对川明参蛋白提取率的影响