[发明专利]Orexin多肽的化学制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学合成orexin多肽(orein-A)的制备方法，属于医药化学领域。

背景技术

 2008年统计数据显示全球手术量已达2.34亿，我国2009年手术例数即已突破2700万例，这些患者中75%以上需要进行全身麻醉。近年来，随着外科和监测技术的发展，手术死亡率已经大大下降。然而，随着人口老龄化，围术期死亡仍是一个重要的临床问题，欧洲最新的研究结果显示术后7天死亡率高达4%。研究显示，术后心脑损伤、肺部并发症的发生是导致围术期死亡的重要原因，而这些问题的发生都与麻醉药物具有一定关系。临床证据显示老年患者的麻醉后苏醒延迟，是增加围术期死亡率威胁患者生命的最重要因素。针对全麻苏醒期，尽管已有镇痛以及肌松的拮抗药物，但还没有任何一种针对全身麻醉药的拮抗剂问世。出现这一现象的主要原因是以往人们对于全麻觉醒的机制研究尚不深入，对于何种机制调控觉醒尚不明确，传统观念认为觉醒过程仅仅是全麻药物撤退后脑功能的被动复苏。基于这一理论，研发了针对苯二氮?类受体的竞争性抑制剂，如氟马希尼等。然而临床应用中，对于全身麻醉药物如七氟醚、异氟醚、丙泊酚等，苯二氮?类受体竞争性抑制剂毫无作用，并不能作为促醒药物应用。同时，这种屏蔽并非是全麻药物的彻底消退，更类似于一种“被动”等待，由于患者药物代谢差异，这种屏蔽很可能导致患者再度进入麻醉状态，一旦发生，将危及生命。因而，美国麻醉学会《ASA 2013麻醉后管理指南》明确指出“不推荐常规应用氟马西尼（苯二氮?类受体竞争性抑制剂）”作为全麻促觉醒药物。解决这一问题的出路在于寻找有效地特异性全麻药物拮抗剂，而目前尚无针对全身麻醉药的特异性拮抗剂问世。

Orexin-A 是存在于下丘脑的一种神经多肽，参与调节摄食、睡眠-觉醒周期、生殖、体温、血压、激素分泌和感觉等生理功能。1998年Yanagisawa等在大鼠下丘脑腹外侧发现了两种与食欲有关的神经肽，命名为orexin-A（食欲素-A）和orexin-B（食欲素-B）。一系列研究发现：orexin能在神经系统麻醉—觉醒调控中起到重要作用，orexin的激活可以逆转多种全麻药物的作用。

无法获得大量、高纯度的orexin多肽是制约含有orexin多肽药物发展的主要问题。Orexin多肽的化学合成存在的以下问题：（1）其结构含有33个氨基酸，肽序较长，合成难度较大；（2）其中多个疏水氨基酸和一些分子量较大的氨基酸，也增加合成难度；（3）结构中两对二硫键的正确环化是成药性的关键，也是化学合成的难点；（4）合成orexin多肽的纯度检测和质量控制。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型orexin多肽的化学合成方法，使用此方法可以得到g级、高纯度（>98%）的原料药，较好的解决了其成药性的问题，以克服现有技术的主要不足。

为达到以上目的，本发明是采取如下技术方案予以实现的：

一种orexin多肽化学合成方法，采用固相合成法合成线性粗肽，先用双氧水氧化形成6和12位间的第一对二硫键，然后利用碘剂直接形成7和14位间的第二对二硫键，得环化的orexin多肽溶液，采用HPLC-MS进行合成粗肽质量控制。

固相合成法合成线性粗肽是采用0.3~0.45mmol/g  Rink Amide Resin合成线性肽树脂，进入AA循环，逐一合成含有33氨基酸的线性粗肽多肽。

上述合成过程中，采用Kaiser检测法检测树脂上的游离氨基，判断缩合反应是否完全；采用HPLC-MS确认取样裂解得到粗肽的合成质量是否正确。

更具体地说，所述的orexin多肽化学合成方法包括以下步骤：

（A）采用Rink Amide Resin合成线性粗肽制备树脂，进入AA循环，采用固相合成法，按序逐一合成，得到33个氨基酸的线性粗肽；

（B）将步骤（A）所得的线性粗肽，先用双氧水氧化形成6和12位间的第一对二硫键，然后利用碘剂直接形成7和14位间的第二对二硫键，得环化的orexin多肽溶液；

（C） 将步骤（B）所得的环化的orexin粗肽溶液经分离性HPLC纯化、转盐及冷冻干燥后得到orexin多肽，利用Kaiser检测法和HPLC-MS法，完成上述合成步骤中所得产物的结构和纯度测定；

上述方法合成得到的orexin多肽可用于制备促进全身麻醉觉醒药物或促进全麻觉醒药物的前体化合物。