[发明专利]一种检测α2珠蛋白基因点突变的巢式非对称PCR试剂盒

权利要求书

1.用于检测α2珠蛋白基因点突变的巢式非对称荧光PCR试剂盒，所述试剂盒包括：

（1）用于特异性扩增α2珠蛋白全序列的引物对；

（2）用于扩增CD30/CD31目的片段DNA单链的引物；

（3）用于扩增WS/QS/CS目的片段DNA单链的引物；

（4）特异性检测α2珠蛋白基因WS、QS、CS、CD30、CD31五个点突变序列的野生型及突变型的荧光探针，以及相对应的淬灭探针，通过在荧光探针上修饰不同的荧光信号和/或不同的解链温度来区分WS、QS、CS、CD30、CD31五个点突变序列的野生型及突变型；

所述用于特异性扩增α2珠蛋白全序列的引物对的Tm值比其他引物或荧光探针、淬灭探针的Tm值高5-10℃。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述用于特异性扩增α2珠蛋白全序列的引物对的Tm值≥72℃。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于扩增目的片段DNA单链的引物的Tm值≤63℃。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，特异性检测α2珠蛋白基因WS、QS、CS、CD30、CD31五个点突变序列的荧光探针以及相对应的淬灭探针的Tm值≤63℃。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述用于特异性扩增α2珠蛋白全序列的引物Tm值为72℃-74℃，其中：正向引物位于α2珠蛋白基因第1外显子5’端UTR区域；反向引物位于α2珠蛋白基因第3外显子3’端UTR区域，该区域须避开与α1珠蛋白基因的同源序列，从而保证扩增α2珠蛋白基因的特异性与准确性。

6.根据权利要求1或5所述的试剂盒，其特征在于，所述用于特异性扩增α2珠蛋白全序列的引物对如下所示：

F：5’- gctcgcgggccggcact - 3’（SEQ ID NO. 1），

R：5’-ctccattgttggcacattccgggatag-3’（SEQ ID NO. 2）。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于： 1）所述用于扩增CD30/CD31目的片段DNA单链的引物，是位于CD30/CD31突变3’端100-130bp位置的反向扩增引物，Tm值62℃-64℃； 2）所述用于扩增WS/QS/CS目的片段DNA单链的引物，是位于CS突变3’端10-35bp，距权利5所列特异性α2珠蛋白全序列3’末端2-5bp的反向扩增引物，Tm值62℃-64℃。

8.根据权利要求1或7所述的试剂盒，其特征在于：

1）所述用于扩增CD30/CD31目的片段DNA单链的引物序列为：5’-ctgcggggagaagcagagt -3’（SEQ NO. 3）；

2）所述用于扩增WS/QS/CS目的片段DNA单链的引物序列为：5’- gggcaggaggaacggctac -3’（SEQ NO.4）。