[发明专利]通过检测HLA-DR表达量评估CD14阳性细胞抗原呈递能力的方法

权利要求书

1.通过检测HLA-DR表达量评估CD14阳性细胞抗原呈递能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）从感染甲型H7N9的患者外周静脉血中筛选出CD14和HLA-DR这一组特征性细胞表面分子标记；

（2）通过流式细胞术检测CD14和HLA-DR在外周血中的表达量；

（3）当HLA-DR占CD14阳性细胞的比例为63.16%～95.32%时，表示CD14阳性细胞抗原呈递能力处于正常范围；当HLA-DR占CD14阳性细胞的比例低于63.16%时，表示CD14阳性细胞呈递能力弱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）的具体实施过程如下：

A、H7N9患者血的收集：

收集重症H7N9患者的外周静脉血全血样本至少10例、轻症H7N9患者的外周静脉血全血样本至少10例；患者已通过年龄、体温指标及根据临床表现评估的APACHEⅡ和PMEWS评分明确诊断患有重症或轻症H7N9病毒感染；另外收集健康体检对照者全血；

B、检测指标的抗体染色：

将H7N9患者的外周静脉血全血样本50微升加入流式管，随后加入流式抗体anti-CD14-PE10微升和anti-HLA-DR-FITC10微升；待血液和抗体充分混匀后置于4度环境静置孵育30分钟。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）的具体实施过程如下：

A、白细胞悬液的制备：

将已经孵育制备的样本取出，加入人红细胞裂解液HLA1毫升，充分混匀并不间断轻微震荡至液体澄清，加入PBS约3毫升，终止裂解反应；离心1200rpm，5分钟后，弃掉上清液体，打散底部细胞，再加入500微升制备成白细胞悬液；

B、流式检测外周相应指标：

将制备好的白细胞悬液样本置于流式细胞仪上样架，选择FL1和FL2通道上机检测CD14和HLA-DR指标的表达量。