[发明专利]一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法

权利要求书

1.一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)美洲大蠊在-80℃冰箱中灭活；在手术显微镜下去除肠道；用75％乙醇清洗、浸泡15分钟，风干后置于-80℃冰箱保存备用；

(2)取适量的冰冻美洲大蠊在液氮中研磨成粉末；

(3)丙酮脱脂2次后，置于-80℃冰箱中冷冻，随后在真空冷冻干燥机内冻干成粉末；

(4)称取美洲大蠊粉末1g，加入20L的提取液，在涡旋振荡器上充分混匀，置4℃摇床上抽提0.5小时至4小时，之后在转速为12000g，4℃条件下离心30min，吸取上清，即为美洲大蠊过敏原提取物；

(5)用特异性Per a1、Per a2、Per a3、Per a4、Per a6、Per a7、Per a9、Per a10及1-2种次要过敏原抗体鉴定美洲大蠊过敏原粗提物中主要过敏原Per a1、Per a2、Per a3、Per a4、Per a6、Per a7、Per a9、Per a10及1-2种次要过敏原的含量及比例；

(6)根据步骤(5)鉴定结果加入酵母菌或昆虫表达的重组蛋白质，使其达到美洲大蠊自身的五种主要过敏原含量。

2.根据权利要求1所述的一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法，其特征在于：所述1-2种次要过敏原包括Per a5。

3.根据权利要求1所述的一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法，其特征在于：所述美洲大蠊自身的五种主要过敏原含量比例为65％～75％。

4.根据权利要求1所述的一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法，其特征在于：所述提取液为高渗磷酸盐缓冲液，其配方为：NaCl35.1g～70.2g KCl0.2gNa₂HPO₄1.42g KH₂PO₄0.27g，加入800ml ddH₂O，调节pH为5.0～9.0，定容至1L。

5.根据权利要求1所述的一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法，其特征在于：所述的美洲大蠊为纯系，由一对双亲繁殖成。