[发明专利]利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法。

【背景技术】

随着社会及经济的发展，化学农药带来生态环境和人类健康等弊端越来越突出，如化学农药的残留；土壤结构、肥力及植物生态系统的失衡；植物病菌耐药性的产生等。因此，科研人员开始将目光转向于研发生物制剂，目前有很多生物制剂已商品化，如菲律宾的淡紫拟青霉商品，Biocon；江苏省农业科学院的解淀粉芽胞杆菌商品，叶斑宁等。由于很多生物制剂都是液体性制剂，在运输及其药效的保质期上都会受到较大影响。在这种情况下，一些厂家及科研学者开始研发具有肥效和生防作用的固体生物制剂，以减少化肥和农药的使用，达到节约成本，降低土壤污染，保护环境的目的。

作物枯萎病是由尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）引起的一种典型毁灭性土传病害，可造成严重的连作障碍，对重要农作物的生产构成严重的威胁。病原菌从根部为害植物，引起维管束病害，造成植株枯死，在植株的全生育期均可发生。土传性病害在3～4年内就会由零星点片发展为普遍流行性病害。作物枯萎病一般导致减产20%～30%，严重田块可达50%～80%，甚至绝产，已成为限制着我国作物生产发展重要因素。一直以来，化学防治是控制土传病害的主要手段，但会带来病原的耐药性，及环境污染等问题，越来越多的学者认识到控制枯萎病应采用以农业可持续发展为宗旨的生物防治的可持续治理系统。真菌是作物枯萎病重要的生物防治之一。其中木霉菌是一种具有重要价值的生防菌株。

木霉菌对环境具有很强的适应性，杀菌具有广谱性，是一种理想的、难得的生防资源。据不完全资料统计，木霉菌至少对18个属29个种病原菌在体外或体内表现有拮抗作用，尤其对土传病原真菌具有显著的拮抗作用。目前，木霉的防治应用多采用孢子菌剂，要获得产量高，而且质量好的孢子菌剂，发酵是关键，其中固体发酵被公认为是获得真菌孢子的最好方法之一。在固体发酵中，由于菌体在湿度较低的条件下生长，因而通常得到的孢子对干旱条件更具抗性，而且在干燥的环境中更稳定。固体发酵培养基主要以稻草，麸皮，秸秆等农业副产物为主，但来源有限，且成本较高，因此寻找一种新的农业副产物作为固体发酵的主要培养基是必需的。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题，在于提供一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，能够解决现有的肥料与有益生防菌剂分开，或者单纯地将有益生防菌剂与肥料混合，从而带来的生防作用及肥料效果不佳和环境污染等的一系列问题。同时，也可提高农业副产物资源化再利用效率，减少环境污染。

本发明是这样实现的：

一种利用猪粪废弃物生产哈茨木霉菌肥的方法，所述方法步骤如下：

（1）生产用液体菌种的制备：以哈茨木霉（Trichoderma harzianum）FJAT-9040为菌种，以马铃薯葡萄糖液体培养基为液体菌种用培养基，制备生产用液体菌种；

（2）哈茨木霉固体菌肥的制备：以猪粪废弃物为主要成份制备菌肥生产的固体培养基物，与麸皮、麦粒混合后，分装于食用菌袋中，灭菌后，接种步骤（1）所制备的液体菌种，25-28℃恒温培养发酵18-20天，制备哈茨木霉固体发酵产物，发酵结束后将其拌匀，即得哈茨木霉菌肥；

所述哈茨木霉（Trichoderma harzianum）FJAT-9040，于2012年5月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.6109。

进一步地，所述步骤（1）中生产用液体菌种制作步骤为：

步骤A.菌种的活化：配置PDA培养基，121℃灭菌20min，冷却至45℃倒于灭菌平板中，备用；取-70℃保存的哈茨木霉（Trichoderma harzianum）FJAT-9040菌株于PDA培养基平板上划线培养，28～30℃恒温培养3～4天；

步骤B.挑取步骤A中菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，28～30℃，170～200rpm摇床培养4～5天，即为生产用液体菌种。

进一步地，所述步骤（2）中哈茨木霉菌肥的制备步骤为：

步骤C.以猪粪废弃物为主要成份的固体基础培养基配制：猪粪废弃物与麸皮按重量比为9:1～5:5配制形成固体基础培养基；

步骤D.基础培养基中麦粒、无机碳源和无机氮源的添加：在基础培养基中添加麦粒作为固体培养基的疏松物质，再添加蔗糖和硫酸铵，搅拌均匀后加水，调整含水体积比为30%～50%，转入食用菌袋中，灭菌；