[发明专利]一种血葡萄糖的检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

 本发明涉及一种血葡萄糖的检测方法，具体地说，涉及一种酶学速率法人血清血葡萄糖的检测方法及检测试剂盒，用于体外定量测定人血清、血浆中的血葡萄糖的浓度，属于医用诊断制剂技术领域。

背景技术

正常情况下，人体中糖的分解和合成代谢处于动态平衡中，保持相对恒定。血清葡萄糖是指血液中的葡萄糖浓度，一般禁食8～12h后空腹抽取静脉血，标本在1小时内送检，血糖测定是诊断糖尿病的最主要检查项目之一。

正常参考值成人3.9～6.1mmol/L，足月新生儿2.8～4.5mmol/L。异常结果分析，生理性增高见于餐后1～2h和情绪紧张时，但不应超过10mmol/L；生理性降低见于饥饿、妊娠、剧烈运动后。病理性增高有以下几种情况：（1）胰岛功能低下，胰岛素分泌不足的糖尿病；（2）使血糖升高的激素分泌增多，如嗜铬细胞瘤、肾上腺皮质功能亢进（库欣综合征）、垂体前叶功能亢进（肢端肥大症）、甲状腺功能亢进等；（3）中枢性疾病，如颅内压增高，颅内出血，重症脑炎，颅脑外伤、脑瘤、脑膜炎等；（4）其他疾病，如慢性胰腺炎、甲状腺功能亢进、心肌梗死、皮质醇增多症、肢端肥大症、嗜铬细胞瘤、胰高血糖素瘤、肝硬化、妊娠呕吐、脱水、全身麻醉时。病理性降低有以下几种情况：（1）胰岛β细胞瘤，胰岛素分泌过多；（2）降血糖药物用量过多；（3）垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退、艾迪生病、甲状腺功能减退；（4）长期营养不良、严重肝炎、肝硬变、糖原累积病、酒精中毒等。

血糖测定方法很多，迄今为止大体可分为四类：氧化还原法、缩合法、酶法及其他类方法。其中酶法包括葡萄糖氧化酶法（GOD）、己糖激酶法（HK）和葡萄糖脱氢酶法（GDH），其中以GOD法应用最为广泛。己糖激酶（HK）法是目前国际上公认的测定葡萄糖参考方法，但试剂比较昂贵。目前有很少单位仍沿用邻甲苯胺法。其他方法已基本没有使用。以上方法均为终点法测定，有一个共同的缺点就是易受血清本底干扰，而且反应时间长，大大影响了结果的准确性和测定效率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对以上不足，提供一种酶学速率法人血清血葡萄糖的检测方法，用于体外定量测定人血清、血浆中的血葡萄糖的浓度，克服了现有检测方法易受血清本底干扰、反应时间长的缺陷，本发明检测方法以酶催化法，创新使用酶学速率测定法，完全排除了血清本底的干扰，大大缩短了反应时间，操作简便，结果准确可靠，适用于各种生化分析仪器。

本发明的另一目的是提供一种实施该检测方法的检测试剂盒。

为解决以上问题，本发明采用的技术方案是：一种血葡萄糖的检测方法，其特征在于：所述检测方法为采用酶学速率测定法，根据在波长500nm处，反应体系吸光度的升高速率与样本中血葡萄糖的浓度成正比，延迟30～60秒后，测定30～180秒内的吸光度升高速率，得到血葡萄糖的含量。

一种优化方案，所述吸光度上升速率测定步骤：

a、制备反应液

取空白管、标准管及样本管，分别加入缓冲液；然后在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸馏水及标准液，混匀，37℃条件下保温3～5分钟，再加入酶试剂，混匀，得到反应液；或

将缓冲液和酶试剂按比例混合配成试剂工作液，稳定3～5分钟；然后根据测定取所需要的空白管、标准管及样本管，分别加入试剂工作液；再分别在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸馏水及标准液，得到反应液；

b、反应液在37℃条件下反应，延迟30～60秒后，在波长500nm处读取反应液的吸光度变化，读数间隔时间为30～180秒，计算平均每分钟吸光度变化率，得到空白管、标准管及样本管内反应液的每分钟吸光度变化率。

进一步地，所述缓冲液与酶试剂的体积比为5:1～1:1；缓冲液、酶试剂之和与样本的体积比为200:1～100:1。 

进一步地，所述缓冲液为含有25mmol/L对羟基苯甲酸盐的0.1mol/L的磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述酶试剂为葡萄糖氧化酶和过氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶浓度为5～200U/ml；过氧化酶浓度为2～30U/ml。

进一步地，所述标准液为葡萄糖溶液，浓度为2～7mmol/L。

基于所述检测方法的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括包装盒、缓冲液、酶试剂、标准液；

所述缓冲液为含有25mmol/L对羟基苯甲酸盐的0.1mol/L的磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述酶试剂为葡萄糖氧化酶和过氧化酶溶液，葡萄糖氧化酶浓度为5～200U/ml；过氧化酶浓度为2～30U/ml。