[发明专利]一种单克隆抗体及其在检测敌鼠中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体及其在检测敌鼠中的应用。 

背景技术

敌鼠(diphacinone)是一种常见的抗凝血杀鼠剂，属于茚二酮类，为茚满二酮类代表药，常使用其钠盐，称为敌鼠钠盐。敌鼠钠盐是目前使用最普遍的高效、低毒、安全的抗凝血慢性杀鼠剂。该药主要破坏血凝机能和损坏微小血管，引起皮下、内脏、五官等全身性致命性出血，导致中毒死亡。敌鼠或敌鼠钠盐均为高毒品，对小鼠口服来说，敌鼠的LD₅₀为112-196mg/kg，敌鼠钠盐的LD₅₀为61.2-100.7mg/kg。成人口服0.06-0.25g敌鼠钠盐可引起中毒，0.5-2.5g可致死。在我国因误服、使用不当或有意投毒造成人和牲畜中毒死亡的事件时有发生。因此，做好敌鼠的残留检测工作，对于保障食品安全，及时、准确地查明中毒原因，抢救中毒病人具有非常重要的实际意义。 

目前检测敌鼠或敌鼠钠盐的残留的常用方法主要有高效液相色谱法、反相高效液相色谱法、气相色谱法等。该类技术所需设备要求较高、仪器价格昂贵、对操作人员的要求较高，因此不适合高通量样品筛选，难以大量推广。 

发明内容

本发明的目的是提供一种单克隆抗体及其在检测敌鼠中的应用。 

本发明提供的敌鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株DPC(简称杂交瘤细胞株DPC)，已于2014年3月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.8953。 

杂交瘤细胞株DPC分泌的单克隆抗体也属于本发明的保护范围。 

本发明还保护杂交瘤细胞株DPC或所述单克隆抗体在制备用于检测敌鼠或敌鼠衍生物的试剂盒中的应用。所述敌鼠衍生物具体可为敌鼠钠盐。 

本发明还保护所述单克隆抗体在检测敌鼠或敌鼠衍生物中的应用。所述敌鼠衍生物具体可为敌鼠钠盐。 

本发明还保护式(Ⅰ)所示化合物； 

所述载体蛋白具体可为牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)。 

本发明还保护一种检测敌鼠或敌鼠衍生物的试剂盒，包括杂交瘤细胞株DPC或所述单克隆抗体。所述试剂盒还可包括式(Ⅰ)所示化合物。所述敌鼠衍生物具体可为敌鼠钠盐。 

本发明还保护以式(Ⅰ)所示化合物为免疫原得到的抗体。 

本发明采用以下方法制备免疫原和包被原：首先采用羧甲基羟胺法对敌鼠半抗原进行改造从而使其具有羧基活性基团[采用O(羧甲基)羟胺法将敌鼠的一个酮基与O(羧甲基)羟胺反应，生成O—羧甲肟衍生物半抗原]，之后经过缩合反应制得敌鼠与载体蛋白复合物。本发明制备得到的免疫原产生的抗体具备高特异性。 

本发明提供的单克隆抗体灵敏度高、特异性强，可应用于敌鼠或敌鼠衍生物的检测，满足实际需要。采用本发明提供的单克隆抗体结合酶联免疫分析法，可以快速、灵敏、简便地检测动物源性食品中的敌鼠或敌鼠衍生物，可以满足高通量和低成本的要求。本发明具有重大的经济价值和社会意义。 

附图说明

图1为免疫原与包被原的合成路线示意图。 

图2为免疫原、敌鼠钠盐、BSA的紫外扫瞄光谱示意图。 

图3为包被原、敌鼠钠盐、OVA的紫外扫瞄光谱示意图。 

图4为间接竞争ELISA测定单克隆抗体的IC₅₀值的曲线图。 

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。