[发明专利]姜黄挥发油中芳姜黄酮对照品的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离纯化技术，尤其是一种姜黄挥发油中芳姜黄酮对照品的制备方法。

背景技术

姜黄为姜科姜黄属(Curcuma)植物姜黄的干燥根茎。姜黄作为传统中药，始载于《唐本草》，具有破血行气、通经止痛的功能，现代医学研究表明，姜黄具有抗炎，抗氧化，清除自由基，抗微生物及抗肿瘤作用。近年来它被用于治疗高血脂症和具有抗肝毒作用。

芳姜黄酮作为姜黄的一种重要成分，属于萜烯类化合物，在医学方面的研究涉及诱导肿瘤细胞凋亡、抗革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、抗真菌、抗生育、抗蛇毒等功效，对临床开发治疗白血病、恶性淋巴肿瘤、细菌炎症、真菌炎症、甚至糖尿病、肥胖等代谢综合性疾病及节育等方面都有广阔的前景。

姜黄消痤搽剂的有效成分是姜黄挥发油，挥发油的主要成分是芳姜黄酮。以芳姜黄酮作为功能性指标测定姜黄消痤搽剂质量控制体系对进一步保证疗效，加强质量可控性具有重要意义。如何从姜黄挥发油中获得高纯度的芳姜黄酮对照品，是需要解决的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种姜黄挥发油中芳姜黄酮对照品的制备方法，它能从姜黄挥发油中分离获得纯度极高的芳姜黄酮。

本发明是这样实现的：姜黄挥发油中芳姜黄酮对照品的制备方法，以姜黄挥发油为原料，包括如下工艺步骤：

（1）加压正相硅胶柱粗分离：将原料与硅胶按1：10-1：15的质量比，以体积比为30:1-15:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，加压柱层析，通过点薄层板，以石油醚-乙酸乙酯展开，石油醚与乙酸乙酯的体积比为15:1-25:1，在紫外下观察，收集极性相近的混合物，分离得到粗分离物；

（2）加压正相硅胶柱细分离：将粗分离物加硅胶，首次加入的原料与细分离的硅胶的质量比为1:10-1:15，以体积比为100:1-50:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，加压柱层析，通过点薄层板，以石油醚-乙酸乙酯展开，石油醚与乙酸乙酯的体积比为25:1-15:1，在紫外下观察，收集极性非常接近的混合物，分离得到细分离物；

（3）制备高效液相色谱分离得到芳姜黄酮对照品：将细分离物中加入丙酮，细分离物与丙酮的体积比为1 ：5-1:10，以甲醇和水为流动相，甲醇与水的体积为60：40-90:10，流速为5-10 mL/min，15-17分钟出峰，20-22分钟结束，收集得到纯度为99%以上的芳姜黄酮纯品。

为了进一步验证本发明的技术效果，进行了如下实验：

芳姜黄酮单体化合物的分离

1.1 硅胶柱层析粗分离

    称取姜黄挥发油10 g，用石油醚溶解于瓷蒸发皿中，以12 g硅胶拌样，挥干溶剂，备用；按1:10用100 g硅胶（300-400目），以石油醚-乙酸乙酯（15:1）湿法上柱；待柱中硅胶层不再下移后再上样，并以石油醚-乙酸乙酯（15:1）进行加压洗脱，通过点薄层板，以石油醚-乙酸乙酯（15:1）展开，在254nm下观察，收集Rf 0.7处极性相近的混合物，得7.3g。

1.2 硅胶柱层析细分离

称取粗分离得到的混合物7.3 g，用石油醚溶解于瓷蒸发皿中，以10 g硅胶拌样，挥干溶剂，备用；用110 g硅胶（300-400目），以石油醚-乙酸乙酯（50:1）湿法上柱；待柱中硅胶层不再下移后再上样，并以石油醚-乙酸乙酯（50:1）进行加压洗脱，通过点薄层板，以石油醚-乙酸乙酯（25:1）展开，在254 nm下观察，收集Rf 0.5处极性非常接近的混合物，得5.2 g。

对分离得到的混合物通过HPLC进行检测。HPLC条件为柱子Hedera C₁₈（200 mm），流动相甲醇-水（90:10）, 柱温25℃，检测波长254 nm，进样量15 μL，测定结果如图2所示，发现混合物为3个组分，从左至右分别定为1, 2, 3。

1.3 制备型高效液相分离