[发明专利]伪狂犬病病毒变异株双基因缺失毒株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一株伪狂犬病病毒（pseudorabies virus）TJ株双基因缺失毒株，其特征在于：缺失了伪狂犬病病毒TJ株的gI和gE基因，所缺失的序列位于伪狂犬病病毒TJ株基因组的第122804-125101位核苷酸，片段大小为2298bp。

2.按照权利要求1所述的伪狂犬病病毒TJ株双基因缺失毒株，其特征在于：其微生物保藏编号为CGMCC.No.8786；

3.一种构建权利要求1或2所述伪狂犬病病毒TJ株双基因缺失毒株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）构建含有伪狂犬病病毒TJ株病毒DNA的左右同源重组臂L和R、EGFP以及Neo基因完整表达盒的转移载体；

（2）将构建的转移载体转染于接种伪狂犬病病毒TJ株后的Vero细胞，经蚀斑筛选与纯化获得过渡病毒；

（3）将过渡病毒基因组酶切处理后与只含有左右同源重组臂L和R的转移载体共转染细胞，经蚀斑纯化，即得。

4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的转移载体的构建方法包括：以伪狂犬病病毒TJ株病毒DNA为模板，以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对1和SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物2为扩增引物，分别扩增左右同源重组臂L和R，将扩增得到的左右同源重组臂L和R克隆于pOK12载体上，获得转移载体pOK-LR；扩增含有EGFP、Neo基因的完整表达盒；将含有EGFP、Neo基因的完整表达盒克隆于pOK-LR的L和R片段之间获得转移载体pOKLR-EGFP-Neo。

5.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的细胞是Vero细胞。

6.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：将过渡病毒基因组用PmeI和PacI进行酶切处理后与转移载体pOK-LR共转染细胞。

7.权利要求1或2所述的伪狂犬病病毒TJ株双基因缺失毒株在制备防治由伪狂犬病病毒所引起的动物传染病药物中的应用。

8.按照权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的伪狂犬病病毒是伪狂犬病病毒变异株或伪狂犬病病毒经典强毒株。

9.按照权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的动物传染病是动物伪狂犬病。

10.一种预防或治疗动物伪狂犬病的疫苗组合物，其特征在于：包括预防或治疗上有效量的权利要求1或2所述的伪狂犬病病毒TJ株双基因缺失毒株以及药学上可接受的载体或辅料。