[发明专利]一种双菌株联合发酵生产L-缬氨酸的方法

权利要求书

1.一种双菌株联合发酵生产L-缬氨酸的方法，采用两株缬氨酸生产菌联合发酵生产，其特征在于：

两株缬氨酸生产菌分别是黄色短杆菌和重组大肠杆菌；发酵生产缬氨酸的步骤如下：

（1）将黄色短杆菌接种于种子培养基上，进行种子扩大培养得种子液；

（2）将重组大肠杆菌接种于种子培养基上，进行种子扩大培养得种子液；

（3）将步骤（1）培养的种子液接入灭好菌的发酵培养基中发酵得发酵液，发酵至菌体活力下降，发酵过程补加糖液；

（4）将步骤（2）培养的种子液接入步骤（3）中的发酵液中，并补加营养液，继续发酵。

2.根据权利要求1所述的双菌株联合发酵生产L-缬氨酸的方法，其特征在于，步骤（1）中培养条件是，培养温度为30±5℃，培养时间16-24小时，控制全过程的氧溶解饱和度大于20%。

3.根据权利要求2所述的双菌株联合发酵生产L-缬氨酸的方法，其特征在于，步骤（2）中培养条件是，培养温度为37±5℃，培养时间12-18小时，控制全过程的氧溶解饱和度大于20%。

4.根据权利要求3所述的双菌株联合发酵生产L-缬氨酸的方法，其特征在于，步骤（3）中装于发酵罐中的种子液接种量为8-15%（m/v），培养条件为，培养温度为30±2℃，培养时间60-90小时，控制前期的氧溶解饱和度大于20%，中后期的氧溶解饱和度控制在5-10%之间，流加葡萄糖，控制发酵液残糖在1-1.5%（m/v）之间，流加糖液浓度为50-75%（m/v）。

5.根据权利要求4所述的双菌株联合发酵生产L-缬氨酸的方法，其特征在于，步骤（4）中装于发酵罐中的种子液接种量为25-35%（m/v），培养条件为，培养温度为37±2℃，培养时间16-24小时，氧溶解饱和度控制5-10%，流加葡萄糖控制发酵液残糖在1-1.5%（m/v）之间，流加葡萄糖的糖液浓度为50-75%（m/v）。

6.根据权利要求1所述的双菌株联合发酵生产L-缬氨酸的方法，其特征在于，步骤（4）进行发酵后采用液相色谱法检测缬氨酸含量及氨基酸纯度。