[发明专利]一种辛卡利特的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽药物合成技术领域，尤其涉及一种辛卡利特的制备方法。

背景技术

胆囊收缩素（CCK）是一种具有多种分子形式且具有双重分布的脑肠肽，由33个氨基酸组成，具有激素和神经递质的作用。辛卡利特（sincalide）为一八肽分子，是胆囊收缩素的一个片段，具有胆囊收缩素的全部生物活性。其在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的第二位酪氨酸上连接有磺酰基团，CAS号为：25126-32-3，分子式为C₄₉H₆₂N₁₀O₁₆S₃，分子量1143.27，具有如式I所示结构。

研究表明：辛卡利特具有减轻肺脏间质水肿及白细胞浸润，抑制促炎细胞因子生成，改善肺组织结构损伤，改善血流动力学障碍，延缓平均动脉压下降和肺动脉压升高，改善肝、肾微循环血流，恢复心率，降低肺动脉高压，改善潮气量等作用。用于预防和治疗内毒素血症、内毒素休克、脓毒血症、多器官功能障碍综合征(MODS)、全身性炎症反应综合征（SIRS）、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、炎症性肠病等炎症与免疫性疾病。

目前，辛卡利特的制备方法主要有酶法和化学法两种。其中，酶法合成由于涉及酶制剂种类比较多、酶制剂价格昂贵，且中间产物分离困难、制备周期长，目前已不再使用酶法制备辛卡利特。化学合成是目前常用的辛卡利特制备方法。但是由于辛卡利特第二位酪氨酸上连接有一个磺酰基团，在化学合成的过程中对这个基团的处理通常有两种方式，其一为在预先合成的多肽肽序上进行磺酸化，但这种方法磺酸化的过程十分复杂，中间产物的分离不易，收率很低；其二为采用含有磺酸基团的酪氨酸作为原料进行合成，但这种方式偶联困难，且需格外注意防止磺酸基团的脱落，在偶联或树脂裂解的过程中易产生大量副产物，从而导致产品的纯度较低、稳定性不佳。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种辛卡利特的制备方法，该方法制备的辛卡利特产品在保证纯度的同时性质更加稳定。

本发明提供了一种辛卡利特的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：固相合成Fmoc-Phe-树脂；

步骤2：在Fmoc-Phe-树脂上依次偶联-Asp、-Met、-Trp、-Gly、-Met、-Tyr（SO₃Na）、-Asp，制得辛卡利特肽树脂；

步骤3：辛卡利特肽树脂经裂解、沉淀，制得辛卡利特粗品；

步骤4：辛卡利特粗品经溶解、纯化、转盐、冻干，即得；

偶联的偶联剂为HBTU、HOBT与DIPEA的混合物或PyAOP、HOAt与DIPEA的混合物；

裂解的条件为：于-5℃～10℃盐浴30min～120min。

本发明采用的偶联剂可以提高偶联效果，更重要的是降低了现有技术中由于-Tyr（SO₃Na）偶联困难而产生的副产物的含量。提高了辛卡利特产品的纯度和稳定性。裂解采用盐浴的方式，可以有效防止磺酰基团的脱落，进一步的提高了辛卡利特产品的纯度以及稳定性。

作为优选，-Asp的侧链保护基为OtBu，Trp的侧链保护基为Boc。

优选的，偶联-Asp采用Fmoc-Asp（OtBu）-OH；偶联-Met采用Fmoc-Met-OH；偶联-Trp采用Fmoc-Trp（Boc）-OH；偶联-Gly采用Fmoc-Gly-OH；偶联-Tyr（SO₃Na）采用Fmoc-Tyr（SO₃Na）-OH。

作为优选，偶联-Tyr（SO₃Na）采用的偶联剂为PyAOP、HOAt与DIPEA的混合物，其中PyAOP、HOAt与DIPEA的质量比为1:1.2:2。

作为优选，偶联的时间为1h～4h，温度为18～30℃。

作为优选，偶联-Tyr（SO₃Na）时，-Tyr（SO₃Na）与树脂的摩尔比为2:1。

Fmoc-Tyr（SO₃Na）-OH原料来源不易，价格较高，而采用本发明提供的偶联方法，可以大大提高偶联效率，从而降低了Fmoc-Tyr（SO₃Na）-OH的使用量，节约了成本。