[发明专利]一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法

权利要求书

1.一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：所述多种氨基酸分别为：天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、瓜氨酸、牛磺酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、氯化铵、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、鸟氨酸以及赖氨酸中的一种或几种；所述方法包括以下步骤：

①采取人体血浆，并将血浆用甲醇进行脱蛋白，得到含有多种氨基酸的上清液；

②将所得到的含有多种氨基酸的上清液与衍生化试剂进行衍生化反应，生成有紫外吸收的衍生化产物；

③对衍生化产物采用高效液相法进行分析。

2.根据权利要求1所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：步骤①中脱蛋白的具体过程为：取人体血浆样品置于离心管中，加入甲醇，震荡混匀，再用12000r/m的转速离心5min，并取上清液置于干净的离心管中，该上清液即为步骤①所述的含有多种氨基酸的上清液。

3.根据权利要求1或2所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：步骤②中衍生化反应的具体过程为：向所述的含有多种氨基酸的上清液中加入三乙胺溶液、异硫氰酸苯酯溶液和内标溶液，均匀混合，室温下衍生1h，加入正己烷，漩涡混匀，静置10min，取下层溶液过0.2μm的滤膜，进样分析，以色谱峰面积内标法定量。

4.根据权利要求3所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：所述三乙胺溶液为三乙胺乙腈溶液，所述异硫氰酸苯酯溶液为异硫氰酸苯酯乙腈溶液，所述内标溶液为用0.1mol/L盐酸将内标物溶解并稀释为50μmol/L的内标溶液。

5.根据权利要求4所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：所述内标物为正亮氨酸。

6.根据权利要求2所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：所述人体血浆样品与所加甲醇的体积比为：1∶3。

7.根据权利要求4所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：所述含有多种氨基酸的上清液、三乙胺乙腈溶液、异硫氰酸苯酯乙腈溶液以及内标溶液的体积比为：2∶1∶1∶1。

8.根据权利要求1所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：在用高效液相法进行分析中，所用流动相包括流动相A和流动相B；流速0.8mL/min；检测波长：254nm。

9.根据权利要求8所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：所述流动相A为0.05％醋酸钠溶液，所述醋酸钠溶液是在醋酸钠中加水，并用冰醋酸调PH至6.35，摇匀后用0.45μm的滤膜过滤，超声脱气10min-15min。

10.根据权利要求8所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法，其特征在于：所述流动相B为分析纯的乙腈。