[发明专利]一种羊棘球蚴亚单位疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种羊棘球蚴亚单位疫苗，其特征在于：所述疫苗的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1或2所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗为无佐剂注射剂型疫苗或佐剂注射型疫苗。

4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述佐剂注射剂型疫苗含3mg/3mL的佐剂和含2500μg/3mL的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白，所述佐剂为氢氧化铝或磷酸铝。

5.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述无佐剂注射剂型疫苗含有浓度为2500μg/3mL的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白。

6.权利要求1-5任一项所述疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：构建含SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重组原核表达载体，然后将重组原核表达载体转化原核表达菌株，经发酵培养后纯化，得羊棘球蚴亚单位疫苗。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述原核表达菌株为大肠杆菌BL 21菌株。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述发酵培养为将原核表达菌株在37℃条件下震荡培养至对数期，然后将培养液全部接种于种子罐，再在37℃条件下培养至OD值为1.0-1.5时，将培养液接种于二级种子罐培养，最后转移至发酵罐中进行发酵，当菌体OD值达到40时，添加IPTG至终浓度为1mM诱导4-5小时。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述纯化为将诱导后的培养液离心收集沉淀，经洗液I重悬后进行破碎，破碎后离心收集沉淀，再用洗液I重悬，并添加曲拉通至体积分数为1%，搅拌2-3h，然后用孔径为0.2μm的中空纤维柱超滤去除可溶性杂质，再进行浓缩，并加入与洗液I体积相等的洗液II，继续搅拌2-3h，继续用孔径为0.2μm中空纤维柱超滤，浓缩后收集沉淀，将沉淀用变性液溶解，37℃搅拌过夜，再用10kD截留分子量的中空纤维柱超滤，至悬液体积减少一半时，缓慢补加等体积的复性液，继续进行超滤浓缩，将浓缩液离心去除杂质，继续用0.45μm的中空纤维柱进行超滤，向滤出液中添加相当于滤出液2倍体积的变性液，然后超滤并收集滤出液，再用孔径为0.22μm的中空纤维柱超滤，收集滤出液，并向滤出液中添加相当于滤出液2倍体积的变性液后继续超滤收集滤出液，接着用10kD中空纤维柱超滤，超滤至蛋白含量大于30mg/mL。

10.权利要求1-5任一项所述疫苗在制备预防羊棘球蚴感染的疫苗中的应用。