[发明专利]桑叶复方制剂的预处理方法及1-脱氧野尻霉素的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及桑叶复方制剂的预处理方法及1-脱氧野尻霉素的检测方法。

背景技术

1-脱氧野尻霉素，中文别名：(2R,3R,4R,5S)-2-羟甲基哌啶-3,4,5-三醇、1-去氧野艽霉素、多羟基生物碱或1-脱氧氮杂-D-葡萄糖；英文名称：1-Deoxynojirimycin，简称1-DNJ或DNJ；分子式：C₆H₁₃NO₄；分子量：163.17；CAS号：19130-96-2。

1-脱氧野尻霉素为白色粉末，可以从桑科植物桑叶（Mulberry Leaf）的枝、叶和根中提取得到，是一种α-葡萄干酶抑制剂，对降低人体血糖值有显著的作用。

现有技术中，关于1-脱氧野尻霉素的研究主要集中在1-脱氧野尻霉素的化学成分上。而对于1-脱氧野尻霉素的定性或定量的检测方法的研究相对较少，因为制剂中1-脱氧野尻霉素的预处理过程较为复杂，使得检测方法操作复杂并且误差较大。

杨海霞用衍生化-分光光度计来测定桑叶单方制剂中1-脱氧野尻霉素的含量（桑叶中DNJ分离纯化及含量测定的研究，中国药科，2003:1）。该方法的预处理过程造成1-脱氧野尻霉素的损失，检测结果不准确；得到的桑叶提取物及纯化物均为有色溶液，对吸光度的测定影响较大，测定结果准确度低。

现有技术中，1-脱氧野尻霉素的预处理，也仅仅局限于单方制剂中1-脱氧野尻霉素的预处理的研究。对于复方制剂的研究则较少。复方制剂与单方制剂相比，成分及其含量更为复杂，各成分之间的相互作用使得复方制剂中1-脱氧野尻霉素的预处理更为复杂，直接影响了对复方制剂中1-脱氧野尻霉素的检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，克服现有技术中尚没有针对复方制剂中1-脱氧野尻霉素的预处理方法及其检测方法的研究的缺陷，提供一种桑叶复方制剂的预处理方法及桑叶复方制剂中1-脱氧野尻霉素的检测方法，该预处理方法快速方便，分离度好，能精确得到目标物，且稳定性高，灵敏度高，误差小，该检测方法检测结果精确方法，可以客观的评价复方制剂的产品质量。

本发明的发明人，为了精密检测复方制剂中的1-脱氧野尻霉素，对于桑叶复方制剂的预处理方法进行了大量而深入的研究，在研究过程中，发明人发现：复方制剂与单方制剂相比，成分及其含量更为复杂，仅仅套用单方制剂中1-脱氧野尻霉素的预处理方法，并不能准确有效地提取且检测复方制剂中的1-脱氧野尻霉素。例如，以盐酸提取1-脱氧野尻霉素，衍生化后，HPLC分析，样品分离度不好，峰形出现拖尾或肩峰，含量测定不准确，且测量结果不稳定。

在经过了长久的研究后，发明人发现：将复方制剂溶解于特定的溶剂中，以特定的衍生化试剂，在特定的缓冲液中进行衍生化反应，可生成具有紫外吸收的络合物，再进行分离处理，得到的物质能够通过高效液相色谱-紫外检测得到，且检测的准确度、精密度、重复性等效果优异。

本发明的目的之一在于，提供一种桑叶复方制剂的预处理方法，所述的预处理方法包括以下步骤：

将桑叶复方制剂的溶液、缓冲溶液和芴甲氧羰酰氯的溶液混合均匀，再与甘氨酸混合均匀，过滤，即可；其中，所述的桑叶复方制剂的溶液中的溶剂为体积百分比80%的甲醇溶液和/或体积百分比80%-100%的乙醇溶液；所述的缓冲溶液为硼酸盐缓冲液。

以下，针对上述预处理方法的进一步优选的条件，做如下说明：

本领域技术人员均理解：复方制剂是指两种或两种以上的药物混合制剂。本发明的预处理方法适用于本领域常规的桑叶复方制剂中1-脱氧野尻霉素的预处理。所述的桑叶复方制剂较佳地包括40%-50%的桑叶提取物、25%-35%的苦瓜提取物、12%-17%的黄芪提取物和5%-9%的麦冬提取物，所述百分比为质量百分比。所述的桑叶复方制剂更佳地为希尔牌复方桑叶胶囊。

本发明中，所述的桑叶复方制剂的溶液的制备方法较佳地为：将所述的桑叶复方制剂溶解于所述的溶剂中，摇匀和/或超声处理。所述的超声处理较佳地为在功率100W和频率40kHz条件下处理20min。

所述的桑叶复方制剂的溶液中，所述的溶剂的添加量较佳地为每0.2-0.6g桑叶复方制剂添加25mL的溶剂，更佳地为每0.3g桑叶复方制剂添加25mL的溶剂。