[发明专利]鼠李糖乳杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及食品技术领域，更具体地讲，涉及从青贮饲料中分离的鼠李糖乳酸杆菌。

背景技术

国际上对益生菌的定义为：活的微生物，当摄入足够大数量时，对宿主有益健康作用。Probiotics: living microorganism, which when ingested or locally applied in sufficient numbers, provide the consumer with one or more proven health benefits(EFFCA,2003)。益生菌的最大特点就在一个“活”字上，从饮用效果来说，普通乳酸菌要想到达肠胃产生良性作用，首先在销售过程中要保持存活，而且在饮用后还要抵抗胃液、胆汁的强酸性消化作用。

目前益生菌已经被认为是一类具有特定保健功能的微生态物质，对动物或人体健康具有重要意义。其保健功能大致有以下几点：A、减轻乳糖不耐受症状；B、抑制病原菌；C、提升胃肠道免疫功能；D、改善消化功能；E、抑制肿瘤发生；F、降低血浆胆固醇浓度。

迄今为止，科学家已发现的益生菌大体上可分成3大类，其中，市面上比较常见的是乳杆菌类和双歧杆菌类。

青贮饲料是把青饲料切碎，经密封、微生物发酵而成的一种耐贮存和适口性好的饲料。天然发酵青贮饲料中含丰富的微生物资源，其中乳酸菌的品质不仅决定了饲料质量的好坏，而且其自身也在食品、医药等轻工业有潜在的应用价值而倍受关注。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是，提供一株鼠李糖乳杆菌并保藏于中国典型培养物保藏中心。

本发明所要解决的第二个技术问题是，提供鼠李糖乳杆菌的应用。

为了解决上述第一个技术问题，本发明提供鼠李糖乳杆菌L1，所述鼠李糖乳杆菌L1保藏编号为CCTCC NO: M 2014048。

为了解决上述第二个技术问题，本发明提供鼠李糖乳杆菌L1在制备发酵乳、健康食品及保健制品中的应用，所述健康食品及保健制品是指保护胃肠道系统、增强免疫力的食品或制品。

本发明鼠李糖乳杆菌L1保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号 武汉大学 中国典型培养物保藏中心 邮编 430072，命名为鼠李糖乳杆菌L1（Lactobacillus rhamnosus L1），保藏日期为2014年2月27日，保藏编号为CCTCC NO: M 2014048。

本发明的有益效果：本发明从青贮饲料中分离鼠李糖乳杆菌，通过多种生物学方法，确定其在分类学上的属、种地位，判定其属于一株鼠李糖乳杆菌。本发明的鼠李糖乳杆菌对体内的不良环境，如溶菌酶、胃酸、胆汁酸盐具有较强的耐受性，并能在胃肠道定植，抵抗外界病原菌侵袭，对胃肠道系统产生保护作用，且具有增强免疫力的能力。因此，可应用于发酵乳、健康食品及保健制品中。

附图说明

图1. 采用乳酸菌通用16SrDNA扩增引物PCR扩增片段为1500bp左右证明该细菌属于乳酸菌。

图2. 利用该菌株16SrDNA序列结果和标准菌株进行比对分析（Mega4.1软件），以上系统发育树显示该菌株和鼠李糖乳杆菌亲缘关系最近，所述鼠李糖乳杆菌用1表示。

图3. 利用鼠李糖乳杆菌特殊引物进行PCR，得到约为586bp目标条带，进一步表明所述菌株属于鼠李糖乳杆菌。

图4. 高效液相色谱（HPLC）测定所述细菌发酵液的代谢物种类主要有乳酸、乙酸、柠檬酸，其中乳酸是其主要的代谢产物、含量较高。

图5. 溶钙环法测定所述鼠李糖乳杆菌产乳酸能力。在MRS固体培养基中添加1%的CaCO₃,划线培养所述鼠李糖乳杆菌，单菌落周围的CaCO₃被乳酸溶解，形成透明圈，进一步表明所述菌株具有产乳酸能力。

图6. 检测所述鼠李糖乳杆菌溶菌酶耐受性。在MRS培养基中添加25ug/mL溶菌酶，以MRS培养基为对照，检测OD600，所述菌株生长情况不受溶菌酶抑制，表明其对口腔环境具有耐受性。

图7. 检测所述鼠李糖乳杆菌胃酸、胆盐耐受性。pH2.5和0.3% 胆盐对所述菌株生长基本不抑制，进一步表明该菌株能耐受胃肠不良环境。

图8. 通过HeLa细胞和LS-174T细胞检测所述鼠李糖乳杆菌对上皮细胞的粘附性。所述菌株对肠上皮细胞LS-174T的粘附性明显高于对宫颈细胞HeLa，表明该菌株能在肠道中进行定植。