[发明专利]一对多肽及其编码基因和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体而言，涉及一对多肽及其编码基因与应用，尤其涉及一对特异识别猪A20基因的多肽及其编码基因和应用。

背景技术

A20属于抗凋亡基因家族，除具有抗凋亡的作用外，它也是NFκB信号通路一个重要的抑制因子。而且，相对于其它NFκB抑制因子而言，A20具有其自身独特的优势，一方面可克服lκBα促凋亡的缺点，另一方面也不存在p65RHD发挥功能的入核门槛(即p65RHD须进入核内方可发挥抑制作用)。人A20目前已成功应用于异种供体用转基因猪制作(Oropeza et a1.，2009)，其抗内皮细胞凋亡、抗炎症的作用在个体水平得到了验证。因此，A20基因可作为猪抗病育种及异种移植研究的一个重要候选基因。在细胞或个体水平上对猪A20基因进行敲除或修饰，可解析猪A20基因的功能，为猪育种及医药研发服务。

转录激活子样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nucleases，TALENs)技术是一个高效的基因打靶新工具。转录因子激活效应物家族中有一种蛋白(TALEs)能够识别、结合DNA。TALE与DNA序列特异性结合主要是由TAL结构内34个恒定氨基酸序列介导。将TALEs与Fokl核酸内切酶的切割域相连接，形成TALENs，从而可以实现对基因组DNA序列的精确修饰。TALENs是一种异源二聚体分子(两单位的TALE DNA结合结构域融合到一单位的催化性结构域)，能够切割两个相隔较近的序列，从而使得特异性增强。

发明内容

本发明的目的是提供一对特异识别猪A20基因的多肽及其编码基因和应用。本发明利用这对多肽构建获得的一对重组的转录激活子样效应因子(TALE)能够特异性地识别猪A20基因。本发明还利用这对转录激活子样效应因子构建获得的一对转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)，能够对猪A20基因进行准确、高效地靶向修饰。

具体地，本发明的目的是这样实现的：

一对特异识别猪A20基因的多肽(命名为特异多肽对)，由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽乙由17个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；

所述多肽甲中的16个双连氨基酸依次如下：序列表的序列3自N末端第12-13位氨基酸残基、第46-47位氨基酸残基、第80-81位氨基酸残基、第114-115位氨基酸残基、第148-149位氨基酸残基、第182-183位氨基酸残基、第216-217位氨基酸残基、第250-251位氨基酸残基、第284-285位氨基酸残基、第318-319位氨基酸残基、第352-353位氨基酸残基、第386-387位氨基酸残基、第420-421位氨基酸残基、第454-455位氨基酸残基、第488-489位氨基酸残基和第522-523位氨基酸残基；

所述多肽乙中的17个双连氨基酸依次如下：序列表的序列4自N末端第12-13位氨基酸残基、第46-47位氨基酸残基、第80-81位氨基酸残基、第114-115位氨基酸残基、第148-149位氨基酸残基、第182-183位氨基酸残基、第216-217位氨基酸残基、第250-251位氨基酸残基、第284-285位氨基酸残基、第318-319位氨基酸残基、第352-353位氨基酸残基、第386-387位氨基酸残基、第420-421位氨基酸残基、第454-455位氨基酸残基、第488-489位氨基酸残基、第522-523位氨基酸残基和第556-557位氨基酸残基。

所述多肽甲的氨基酸序列具体可如序列表的序列2所示。

所述多肽乙的氨基酸序列具体可如序列表的序列4所示。

本发明还保护一对DNA分子(命名为特异DNA分子对)，由编码所述多肽甲的DNA分子甲和编码所述多肽乙的DNA分子乙组成。