[发明专利]一种应用DSE真菌进行蓝莓育苗及大面积栽培的方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种应用从越橘属植物蓝莓根内分离获得的DSE真菌进行蓝莓育苗及大面积栽培的方法。

背景技术：

蓝莓（Blueberry），学名越桔，属于杜鹃花科、越橘亚科、越橘属（Vaccinium spp.）多年生落叶或常绿灌木。原产地和主产区都在美国。其果实中含有丰富的营养成分，具有延缓脑神经衰老、解除眼睛疲劳并增加视力、增强心脏功能和抗癌的独特功效，联合国粮农组织将其列为人类五大健康食品之一。

目前，国际上栽培的蓝莓品种主要有：适于温带栽培的高灌蓝莓，适于高寒地带栽培的矮灌蓝莓和适于亚热带或热带栽培的兔眼蓝莓。蓝莓的根系细，呈纤维状，没有根毛，吸收能力小，适宜在土壤疏松、湿润、有机质含量高的地域栽培，其光合最适温度范围相对较小。由于蓝莓对生长环境要求高，自然繁殖率低，生长缓慢，在加上蓝莓果本身较高的营养价值，近年来对蓝莓的需求量不断增加，导致蓝莓的价格昂贵。

蓝莓的试管苗快速繁殖虽然获得了成功，但试管苗的培养步骤复杂且难度高，尤其是幼苗生根方面，一般的培养基生根率不高；试管苗出瓶后生长缓慢、生长周期长等问题成为制约蓝莓大面积栽培的主要障碍。

发明内容：

本发明的目的在于克服上述已有技术的不足而提供一种方法简单、易于大面积推广，投资少、不施任何肥料和农药，缩短育苗的生产周期，增加蓝莓苗的分支数量和苗的生长量，提高苗的抗旱性，实现蓝莓绿色优质高产的应用DSE真菌进行蓝莓育苗及大面积栽培的方法。

本发明的目的可以通过如下措施来达到：一种应用DSE真菌进行蓝莓育苗及大面积栽培的方法，其特征在于其包括如下步骤：

1）、DSE真菌的培养：

将DSE真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于PDA培养基的平皿中，于21-25℃恒温培养11-19天，分别在菌落边缘打孔成菌饼，并接入液体培养基进行培养或接入固体培养基进行培养；

所述的DSE真菌液体培养基的组成按重量百分计为：葡萄糖1.5-4.5%，麦芽浸膏1.5-4.5%，大豆蛋白胨0.3-0.7%，余量水，培养基pH值为50-6.0；震荡培养，培养容器装量10-40%；液体培养基高压灭菌后接入DSE真菌；种子菌种接种量为培养容器装量的10-20%；液体培养的培养条件为：摇床震荡转速为130-150r/min；21-25℃培养26-30天；培养结束后可直接使用或用匀浆机打碎菌体后备用；

所述的DSE真菌固体培养基由固体基本培养基与液体MEA组成，固体基本培养基的组成按重量计为：麦麸：麦壳：阔叶树锯末=1-2:1-3:1-3；液体MEA量为以上麦麸、麦壳、阔叶树锯末总重量的20-40%，培养基pH为5.0-6.0，静置培养，培养容器装量30-70%；固体培养基灭菌后接入DSE真菌，菌种接种量为培养容器装量的10-20%；固体培养的培养条件为：21-25℃培养26-30天；待菌丝长满整个培养基质时培养结束，可直接使用或用粉碎机粉碎后备用； 

2）、蓝莓苗的培养：

（1）蓝莓芽分化：按常规组培技术培养，所用的培养基是以WPM培养基为基本培养基，在每升WPM培养基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、琼脂5-15g，添加的植物激素为玉米素1.0-3.0mg，培养基pH5.0-6.0；静置暗培养，培养容器装量10-30%，光照培养的条件为温度15-25℃，光照强度为1000-3000lx，光照时间8-16h/天，培养时间40-120天；

（2）蓝莓丛芽增殖：按常规组培技术培养，所用的培养基是以WPM培养基为基本培养基，在每升WPM培养基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、琼脂5-15g，添加的植物激素为玉米素0.5-2.5mg，培养基pH5.0-6.0；静置暗培养，培养容器装量10-30%，光照培养的条件为温度15-25℃，光照强度为1000-3000lx，光照时间8-16h/天，培养时间40-120天；

（3））蓝莓苗继代培养：按常规组培技术培养，所用的培养基是以WPM培养基为基本培养基，在每升WPM培养基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、琼脂5-15g，添加的植物激素为玉米素0.5-2.5mg，培养基pH5.0-6.0；静置暗培养，培养容器装量10-30%，光照培养的条件为温度15-25℃，光照强度为1000-3000lx，光照时间8-16h/天，培养时间40-120天；