[发明专利]乳糖化壳聚糖的排铅作用研究

权利要求书

1.乳糖化壳聚糖的制备方法，其特征在于针对性的去除肝脏中的铅离子，制备的乳糖化壳聚糖安全、无毒，对铅的吸附率较高，方法如下：

步骤一，制备乳糖化壳聚糖；

步骤二，检测乳糖化壳聚糖的乳糖含量 ；

步骤三，体外模拟胃环境乳糖化壳聚糖吸附铅离子能力；

步骤四，铅中毒实验动物模型的构建；

步骤五，小鼠饲料的制作；

步骤六，小鼠体内排铅实验。

2.根据权利要求1所述的乳糖化壳聚糖的制备方法，其特征是反应条件不同，乳糖化壳聚糖中乳糖的含量不同；所述步骤一，乳糖化壳聚糖的反应条件要进行优化，其方法是将1g壳聚糖，溶于4.8%乳酸溶液中，用水稀释后，加入6g乳糖，室温下搅拌反应3小时，加入1.3g氰基硼氢化钠，然后于室温下反应48小时，透析处理，真空冷冻干燥即得到纯品乳糖化壳聚糖。

3.根据权利要求1所述的乳糖化壳聚糖的制备方法，其特征是乳糖含量高则肝靶向效果高；所述步骤二，检测乳糖化壳聚糖中乳糖含量，其方法是采用苯酚硫酸法测定乳糖化壳聚糖中乳糖的含量，分光光度计测量，采用标准乳糖制作标准曲线，然后进行样品含量测定，以标准曲线计算乳糖含量。

4.根据权利要求1所述的乳糖化壳聚糖的制备方法，其特征是测量体外模拟胃环境中乳糖化壳聚糖的吸附容量；所述步骤三，称取3.2g胃蛋白酶和2.0g NaCl配制模拟胃液，用稀释1倍的HCl溶液调节pH至1.2；在锥形瓶中分别加入10mL模拟胃液和100mg/mL的醋酸铅溶液，加入0.05g乳糖化壳聚糖，充分混匀；在在恒温37 ℃水浴准确振荡（80 r·min-1）消化处理5 h，取出5mL离心，电感耦合等离子质谱法测定铅含量。

5.根据权利要求1所述的乳糖化壳聚糖的制备方法，其特征是构建铅中毒小鼠；所述步骤四，选用48只20g左右的昆明种小鼠，实验前驯养1周，后随机分为4组；分别为正常对照组、铅中毒模型组、壳聚糖组、乳糖化壳聚糖组。

6.其中正常对照组每日自由饮用水，其他各组自由饮用含Pb²⁺浓度为391mg/L的醋酸铅溶液；醋酸铅溶液中加入12.5ul/L醋酸酸化以防铅盐、铅氢氧化物凝集形成絮状沉淀；饲养1周，眼球采血，采血后采用颈椎脱臼处死法处死小鼠，取肝脏，ICP分别测定血液和肝脏中的铅含量。

7.根据权利要求1所述的乳糖化壳聚糖的制备方法，其特征是乳糖化壳聚糖溶于水后形成黏稠的液体，灌胃针残留较多，故将乳糖化壳聚糖做成饲料，在小鼠较为活跃的夜晚进行饲喂，较易被小鼠食用；所述步骤五，将小鼠饲料粉碎，称取99g，然后加入1g乳糖化壳聚糖，在粉碎机中搅匀，加水以柱形模型压型，于50℃烘箱中烘干至恒重，则制含量为1%的乳糖化壳聚糖饲料。

8.根据权利要求1所述的乳糖化壳聚糖的制备方法，其特征是生物体内环境较为复杂，乳糖化壳聚糖效果需检测；所述步骤六，乳糖化壳聚糖组按照每天每只50g/kg体重饲喂小鼠（有效成分为500mg/kg）；各组小鼠照明、通风、温度、湿度、等饲养环境条件相同；饲喂30d后，眼球采血，采血后采用颈椎脱臼处死法处死小鼠，取肝脏，ICP分别测定血液和肝脏中的铅含量。