[发明专利]一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用。

背景技术

瓜类果斑病是西瓜、甜瓜上的一种毁灭性病害，由噬酸菌属燕麦种西瓜亚种（Acidovorax citrulli）引起，是我国对内和对外的重要植物检疫性有害生物。该病主要通过种子带菌传播。苗期和成株均可发病。瓜苗染病沿中脉出现不规则褐色病变，有的扩展到叶缘，从叶背面看呈水渍状，种子带菌的瓜苗在发病后1～3周即死亡。西瓜果实染病，初在果实上部表面现数个几毫米大小灰绿色至暗绿色水渍状斑点，后迅速扩展成大型不规则的水浸状斑，变褐或龟裂，致果实腐烂，分泌出一种粘质琥珀色物质，进一步发展，细菌透过瓜皮进入果内。该病多始于成瓜向阳面，与地面接触处未见发病，瓜蔓不萎蔫，病瓜周围病叶上现褐色小斑，病斑通常在叶脉边缘，有时被一个黄色组织带包围，病斑周围呈水渍状是该病别于其他细菌病害的重要特征。

对于该细菌病害，较为可行的控制措施是实行检疫控制其扩展，而这有赖于准确、快速、灵敏的检测技术的应用。酶联检测技术是一种较为快速准确的检测方法，而瓜类果斑病菌单克隆抗体的研制是酶联检测方法的基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体及其应用。

所述抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体是由分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6分泌产生的，该小鼠杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.8960。

上述分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6CGMCC No.8960分泌产生的抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体，也属于本发明的保护范围。

将所述抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体用标记酶进行标记后形成的酶标抗体，也属于本发明的保护范围。

在本发明中，所述标记酶具体为碱性磷酸酯酶。

本发明所提供的分泌瓜类果斑病菌的单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C6CGMCCNo.8960，或所述抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体，或所述酶标抗体在如下（a1）或（a2）中的应用也属于本发明的保护范围：

（a1）检测或辅助检测瓜类果斑病菌；

（a2）制备检测或辅助检测瓜类果斑病菌的试剂或试剂盒中。

本发明的另一个目的是提供一种检测或辅助检测瓜类果斑病菌的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒中含有独立包装的所述抗瓜类果斑病菌的单克隆抗体或所述酶标抗体。

本发明所提供的试剂盒中，还可含有独立包装的瓜类果斑病菌包被抗体和/或瓜类果斑病菌标准品。

其中，所述瓜类果斑病菌包被抗体可为抗瓜类果斑病菌的多抗；在本发明中，所述瓜类果斑病菌包被抗体具体为ACD公司生产的抗瓜类果斑病菌的多抗，其产品目录号为B260-C1。

本发明所提供的试剂盒中，还可含有独立包装的如下1）-6）试剂中的至少一种：

1）包被缓冲液：溶剂为水，溶质为碳酸钠、碳酸氢钠；所述碳酸钠、所述碳酸氢钠在所述包被缓冲液中的终浓度分别为1.59g/L、2.93g/L，pH值为9.6；

2）封闭液：含20g/L牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液；

3）洗涤缓冲液：含有体积分数0.05%的吐温20的磷酸盐缓冲液；

4）样品抽提缓冲液：溶剂为洗涤缓冲液，溶质为亚硫酸钠和聚乙烯基吡咯烷酮；所述亚硫酸钠和所述聚乙烯基吡咯烷酮在所述样品抽提缓冲液中的终浓度分别为1.3g/L和20g/L；

5）酶标抗体稀释缓冲液：溶剂为所述洗涤缓冲液，溶质为聚乙烯基吡咯烷酮和牛血清白蛋白；所述聚乙烯基吡咯烷酮和所述牛血清白蛋白在所述酶标抗体稀释缓冲液中的终浓度分别为20g/L和2g/L；

6）底物溶液：溶剂为水，溶质为二乙醇胺；所述二乙醇胺在所述底物溶液中的终浓度分别为97mL/L，pH值为9.8。

在本发明中，以上1）-6）试剂中的所述聚乙烯基吡咯烷酮的分子量为24000～40000。

在本发明中，以上1）-6）试剂中的所述磷酸盐缓冲液的溶剂为水，溶质为氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和氯化钾；所述氯化钠、所述磷酸二氢钾、所述磷酸氢二钠和所述氯化钾在所述洗涤缓冲液中的终浓度分别为8.0g/L、0.2g/L、1.15g/L、0.2g/L，pH值为7.4。

本发明的还一个目的是提供一种检测或辅助检测瓜类果斑病菌的方法。

本发明所提供的用于检测或辅助检测瓜类果斑病菌的方法，包括使用所述试剂盒对待测样品（如植物样品）进行检测的步骤。