[发明专利]芝麻显性细胞核雄性不育基因分子标记及制备方法和应用

权利要求书

1.一种芝麻显性细胞核雄性不育基因的分子标记，其特征在于：标记GB50的正向引物序列为：ATGGGTTTATGGCAGGCT，反向引物序列为：GGACTACTCCTCCTCCCCA；SBM298的正向引物的序列为：CCCCTTTTCACTTACGTACAGCAG，反向引物的序列为：CTCTTCCTCCACCATCTCCTCTTC。

2.权利要求1所述的一种芝麻显性细胞核雄性不育基因的分子标记的制备方法，其步骤是：

A、在苗期对显性细胞核雄性不育兄妹交分离群体各单株编号挂牌，然后分单株采集幼嫩叶片，经液氮处理后于-70℃超低温冰箱储存备用，在盛花期，利用田间观察和室内醋酸洋红染色方法，调查群体各单株的花粉育性，将其划分为可育株或不育株；

B、利用EST-SSR引物SBM系列，并根据文献下载SSR引物序列，生物合成；

C、用CTAB法提取芝麻显性细胞核雄性不育系兄妹交群体中的可育株与不育株叶片DNA，采用PCR程序进行扩增；

D、PCR产物的检测根据分辨率不同采用两种不同的方法，第一种为在1%～1.5%浓度g/v的琼脂糖凝胶上电泳，电泳完毕后，进行溴化乙啶染色，凝胶成像系统拍照保存，记录多态性结果；第二种为在聚丙烯酰胺凝胶中点样，电泳完毕后，用2%浓度g/v的AgNO₃银染，普通蒸馏水漂洗，显影液中显影，用凝胶成像系统拍照保存，并记录多态性结果；

E、所用材料是显性细胞核雄性不育兄妹交后代，电泳时差异条带呈现出可育为无带，不育为有带；

F、利用能检测出多态性的引物对全部单株逐一进行检测，将所得数据输入电脑，并用JoinMap3.0软件进行分析，遗传图距用Kosambi函数加以转换，两个性状间的重组交换率由以下公式计算：交换率%=重组型的配子数/总配子数×100；

G、将重组交换率高于15%的标记予以剔除，找出重组交换率为15%以内、特异扩增片段大小为100-500bp的标记；

H、将所得标记检测结果使用JoinMap软件分析，设定LOD值为2.0，发现所有标记都分为一组，随后将LOD值设置为最高值10.0，这些标记没有分开，表明它们之间紧密连锁，获得一个遗传连锁图，标明每个标记与不育基因间的遗传距离及方向，及各个标记间的距离与方向，最终获得了13个与不育基因紧密连锁的标记。

3.权利要求1所述的一种芝麻显性细胞核雄性不育基因的分子标记在芝麻亲本选择中的应用。