[发明专利]一种对巯基苯酚修饰纳米金检测双酚A的方法

权利要求书

1.一种对巯基苯酚修饰纳米金检测双酚A的方法，其特征在于：将对巯基苯酚溶液加入到纳米金溶液中，避光反应至得到对巯基苯酚修饰纳米金溶胶，以已知浓度的双酚A溶液为标准品，对巯基苯酚修饰纳米金溶胶为检测物，在过氧化物酶或过氧化物模拟酶，与H₂O₂共同存在的条件下，对巯基苯酚修饰纳米金发生聚集，检测含不同已知浓度的双酚A溶液的对巯基苯酚修饰纳米金溶胶在720nm和520nm处的光密度，以720nm和520nm处光密度的比值为纵坐标，以2为底双酚A浓度的对数为横坐标，根据检测的数据绘图，拟合后得到双酚A的标准曲线，根据标准曲线得到标准曲线的函数关系式y=kx+b，以实际双酚A样品为被检测物，对巯基苯酚修饰纳米金溶胶为检测物，在过氧化物酶或过氧化物模拟酶，与H₂O₂共同存在的条件下，对巯基苯酚修饰纳米金发生聚集，检测含实际双酚A样品的对巯基苯酚修饰纳米金溶胶在720nm和520nm处的光密度，将720nm和520nm处光密度的比值代入标准曲线的函数关系式的y值中，计算出x值，再根据x值计算出实际双酚A样品的浓度。

2.根据权利要求1所述的对巯基苯酚修饰纳米金检测双酚A的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）对巯基苯酚修饰纳米金溶胶的制备：

①按摩尔比对巯基苯酚﹕纳米金=0.1﹕1～100﹕1，将对巯基苯酚溶液加入浓度为1～20nM的纳米金溶液中至对巯基苯酚溶液的终浓度为0.1nM～2μM，混合均匀后，避光反应至得到对巯基苯酚修饰纳米金溶胶；

2）建立双酚A的标准工作曲线：

①在酶标仪微孔板的7个以上的孔中分别加入7组以上的相同体积、不同已知浓度的标准双酚A溶液，再分别加入催化量的过氧化物酶溶液或过氧化物模拟酶溶液，过量的H₂O₂溶液和过量的对巯基苯酚修饰纳米金溶胶，作为7个以上的实验组，其中7个以上的实验组中加入的过氧化物酶溶液或过氧化物模拟酶溶液，H₂O₂溶液和对巯基苯酚修饰纳米金溶胶完全相同，在另一个微孔板的一个孔中，加入与各实验组中双酚A溶液等体积的水，再加入与各实验组相同的过氧化物酶溶液或过氧化物模拟酶溶液，H₂O₂溶液和对巯基苯酚修饰纳米金溶胶，作为阴性对照组，10～42℃孵育至各实验组与阴性对照组相比有色差后，检测各实验组中含已知浓度的双酚A的对巯基苯酚修饰纳米金溶胶在波长为520nm和720nm处的光密度；

②以720nm和520nm处光密度的比值为纵坐标，以2为底双酚A浓度的对数为横坐标，根据各实验组检测的数据绘图，拟合后得到双酚A的标准曲线，根据标准曲线得到标准曲线的函数关系式y=kx+b；

3）实际双酚A样品浓度的测定：

①在酶标仪微孔板的一个孔中先加入与步骤2）中各实验组中双酚A溶液等体积的实际双酚A样品，再加入与步骤2）中各实验组相同的过氧化物酶溶液或过氧化物模拟酶溶液，H₂O₂溶液和对巯基苯酚修饰纳米金溶胶，10～42℃孵育至出现色差后，检测含实际双酚A样品的对巯基苯酚修饰纳米金溶胶在720nm和520nm处的光密度，将720nm和520nm处光密度的比值代入标准曲线的函数关系式的y值中，计算出x值，再根据x值计算出实际双酚A样品的浓度。

3.根据权利要求2所述对巯基苯酚修饰纳米金检测双酚A的方法，其特征在于：

所述纳米金溶液中纳米金的粒径为5-50nm。

4.根据权利要求2所述对巯基苯酚修饰纳米金检测双酚A的方法，其特征在于：

所述过氧化物酶为辣根过氧化物酶，过氧化物模拟酶为氯化血红素。

5.根据权利要求5所述对巯基苯酚修饰纳米金检测双酚A的方法，其特征在于：

所述辣根过氧化物酶或过氧化物模拟酶的终浓度为0.2nM-2μM。

6.根据权利要求2所述对巯基苯酚修饰纳米金检测双酚A的方法，其特征在于：

所述H2O2溶液的终浓度为0.00006%-0.6%，该浓度为体积百分比浓度。