[发明专利]肌钙蛋白I 特定位点抗体制备及其检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及肌钙蛋白I特定位点抗体制备及其检测试剂盒。本发明是应用作用于人心肌肌钙蛋白I（cTnI）单肽链特定位点的抗体，及采用该抗体制备测定血清中心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量的免疫乳胶试剂的方法。该发明制备的试剂盒可用于半自动或全自动生发分析仪器。

背景技术

心肌肌钙蛋白I（cTnI）是心肌损伤敏感及特异性最强的标志物之一，在急性心肌损伤及心肌炎中作为判断心肌细胞损伤的金标准，也作为冠动脉综合征危险分层及预后的关键生化标志物。肌钙蛋白属于调节蛋白，分子呈球形，由肌钙蛋白T（TnT）、肌钙蛋白I（TnI）、肌钙蛋白C（TnC）三条肽段组成，其中肌钙蛋白I（cTnI）属于一种碱性蛋白，共210个氨基酸，在血清中游离形式只占4.1%，大部分与肌钙蛋白T及C亚单位结合在一起，以复合体形式存在（WardDG,CornesMP,TrayerIP.StructuralconsequencesofcardiactroponinIphosphorylation.JBiolChem,2002,277(44):41795），此外还有可能以氧化型、还原型、磷酸化、去磷酸化及蛋白降解形式释放（WardDG,AshtonPR,TrayerHR,etal.AdditionalPKAphosphorylationsitesinhumancardiactroponinI.EurJBiochem,2001,268(1):179），属于心肌损伤高敏感指标性物质，在“微型心肌损伤”中肌钙蛋白I即可出现阳性结果，因此是临床上作为心肌细胞损伤的标志性生化检测项目之一。

由于肌钙蛋白I（cTnI）在血清中存在的形式多样，而且衰减周期短，因此对识别肌钙蛋白I（cTnI）的抗体有很高要求，且不同方法制备的抗体在测定肌钙蛋白I（cTnI）含量时，所得结果也完全不同，使得临床上对肌钙蛋白I（cTnI）含量测定无法标准化。

临床上对肌钙蛋白I（cTnI）的检测灵敏度及特异性要求很高，虽然测定肌钙蛋白I（cTnI）的方法很多，但是定量测定受到许多因素的影响，从而导致各种检测结果之间相差很大。其中最主要原因是在患者血清中肌钙蛋白I（cTnI）会有不同程度的降解、游离、复合物形式及不同的清除率，形成肌钙蛋白I（cTnI）在血清中的不同半衰期，因此各种检测方法中分别使用针对上述不同抗原决定簇的抗体，其免疫反应必然有很大差异。

目前关于比浊测定法测定肌钙蛋白I（cTnI）的试剂有很多厂家，但是不管是试剂灵敏度，还是特异性都很难满足临床检测要求，这是因为肌钙蛋白I（cTnI）在正常人血清中含量极低，在0.08ng/ml以下，而大多比浊法检测极限在1ng/ml，而且在此检测极限情况下，影响测定结果的因素也被成倍放大。

发明内容

本发明的目的是为了解决以上现有技术测定肌钙蛋白I（cTnI）的试剂中存在灵敏度，还是特异性都很难满足临床检测要求的问题，使得临床上对肌钙蛋白I（cTnI）含量测定标准化；本发明是应用作用于人心肌肌钙蛋白I（cTnI）单肽链特定位点的抗体，及采用该抗体制备测定血清中心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量的免疫乳胶试剂，该免疫乳胶试剂可用于半自动或全自动生化分析仪器准确、特异性的测定血清中心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量。

本发明的技术方案

1本发明所涉及的肌钙蛋白I特定位点抗体检测试剂盒，包括针对肌钙蛋白I氨基端、羧基端和中心区域三条目的肽段的特定位点抗体制备的免疫胶乳试剂，缓冲液，促凝剂和氯化钠组成的反应剂。

2.该试剂盒中的免疫胶乳试剂是按以下方法制备的：

（1）通过蛋白水解法将如序列1所述序列的cTnI蛋白序列分解成氨基端，羧基端及中心区域三条如序列2、序列3和序列4所述序列目的肽段，并进行纯化的到相应具有半抗原性质的肽段；

（2）将以上所获得三个肽段经牛血清白蛋白修饰后进行动物免疫，获取作用于该肽段抗原决定簇的抗血清，再利用该肽段制备亲和层析柱进行亲和层析后获取该肽段特异性多克隆抗体纯品；

（3）利用（2）获取的三种抗体分别与微球进行共价偶联后得到的三种抗体微球按一定比例混合后制备成免疫胶乳试剂。

具体实施方案