[发明专利]一株耐酸长双歧杆菌JDY1017dpH及其应用无效
申请号: | 201410114641.X | 申请日: | 2014-03-25 |
公开(公告)号: | CN103865856A | 公开(公告)日: | 2014-06-18 |
发明(设计)人: | 杨虹;杨旭;杭晓敏;张旻;柳向龙 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12R1/01 |
代理公司: | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人: | 杨元焱 |
地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 耐酸 长双歧 杆菌 jdy1017dph 及其 应用 | ||
1.一株耐酸长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)JDY1017dpH,其保藏登记号为CGMCC No.8371,其16S rRNA基因部分核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的长双歧杆菌JDY1017dpH,其特征在于,所述长双歧杆菌JDY1017dpH具有以下特性:
(1)优势的耐酸性能
经pH3.5处理4h后,每毫升菌液活菌数的对数值log CFU/ml=为7.53±0.41,其耐酸性能明显优于普通菌株;
(2)耐酸性能具有遗传稳定性
新筛选到的菌株JDY1017dpH经pH3.5处理4h后,其每毫升菌液活菌数的对数值log CFU/ml=7.12±0.10,连续传代20次并经pH3.5处理4h后,其每毫升菌液活菌数的对数值log CFU/ml=7.57±0.15;
(3)不同的细胞膜脂肪酸含量百分比
新筛选到的菌株JDY1017dpH的C16∶0和C16∶1脂肪酸含量百分比分别为24.786±1.162和5.460±0.908,显著低于普通菌株;而C18∶0、C18:1和cycC19∶0脂肪酸含量百分比分别为4.281±0.521、44.066±1.844和11.342±0.996,显著高于普通菌株;平均碳链长度为17.085±0.049,显著长于普通菌株;
(4)具有更低的细胞膜流动性
新筛选到的菌株JDY1017dpH细胞膜的微粘度r=0.135±0.006,明显高于普通菌株,即细胞膜流动性明显低于普通菌株。
3.权利要求1所述长双歧杆菌JDY1017dpH的获取方法,其特征在于,包括以下步骤:
A、将新鲜的健康青年人粪便5克用50ml粪便稀释液振荡成粪便匀浆液,将1ml粪便匀浆液接入9ml新鲜的pH7.4BL液体培养基中,37℃厌氧培养24h,用接种环挑取菌液在pH6.5的TPY固体培养基平板上划线,37℃厌氧培养24h后,挑取单菌落接种于50ml新鲜的pH7.4BL液体培养基中,37℃厌氧过夜培养至平台期后,7600g离心10min获得菌体,再将菌体转移至pH3.5新鲜的BL液体培养基中,37℃厌氧过夜培养后,7600g离心10min获得菌体;
B、再用pH7.4的磷酸缓冲液洗涤两次后,重悬于500μl pH7.4的磷酸缓冲液中,然后涂布于pH6.5的TPY固体培养基中,37℃厌氧培养3~4天至生长出单菌落,挑取单菌落进行镜检,确认达到菌株纯种分离,并分子鉴定该菌株为长双歧杆菌,命名为长双歧杆菌JDY1017dpH;
C、将长双歧杆菌JDY1017dpH以1%接种量接种于新鲜的pH7.4BL液体培养基中,37℃厌氧培养24h,即得长双歧杆菌JDY1017dpH菌株的发酵液。
4.如权利要求3所述的长双歧杆菌JDY1017dpH的获取方法,其特征在于,所述BL液体培养基、TPY固体培养基和磷酸缓冲液中均含有重量百分含量为0.05%的半胱氨酸盐酸盐。
5.如权利要求1所述的长双歧杆菌JDY1017dpH的应用,其特征在于:所述的长双歧杆菌JDY1017dpH菌株用于日常发酵食品、保健食品和药品的生产领域中。
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