[发明专利]用于检测氯霉素的免疫抗原和包被抗原的制备

说明书

技术领域

本发明涉及食品、化妆品中氯霉素检测技术领域，尤其是指用于检测氯霉素的免疫抗原和包被抗原的制备。

背景技术

氯霉素是一种广谱抗生素，其抗菌效果好，价格低廉，曾广泛应用于预防和治疗动物疾病。然而氯霉素具有严重的毒副作用，会引起动物机体正常菌群失调，同时可能引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏症等疾病。

欧盟2377/90/EEC法规、美国FDA等均规定氯霉素不能任何动物制食品，以及动物的饲料和生长环境中使用。2002年我国农业部发布235号公告《动物性食品中兽药最高残留量》，规定氯霉素及其盐、酯（包括：琥珀氯霉素）在所有食品动物、所有可食组织中不得检出。

氯霉素因其抗菌消炎作用，对皮肤炎症有一定疗效，因此常被添加在祛痘除螨类化妆品中。但由于人体脸部皮肤柔嫩，黏膜血管丰富，对药物吸收非常快，氯霉素会被迅速吸收，从而破坏皮肤表面的正常菌群，导致皮疹、速发性过敏等不良反应。如果长期使用含有氯霉素的化妆品，还有可能导致内脏损伤。因此欧盟化妆品法规(EC)1223/2009和我国卫生部颁布的《化妆品卫生规范》均将包括氯霉素在内的抗生素类化合物列在“禁用清单”中。

对氯霉素的检测方法有微生物检测法、色谱分析法、免疫检测法。微生物检测法灵敏度低；色谱分析法样品前处理麻烦，费用高；免疫分析法具有快速、灵敏度高、高通量的特点。其中免疫分析方法有酶联免疫法、胶体金免疫层析技术等。其中酶联免疫分析法操作相对繁琐，对操作人员的专业知识要求较高，相比之下，胶体金免疫层析技术基于肉眼水平的检测，不需任何仪器设备和试剂，比酶联免疫法省略了加显色剂和终止液的步骤，更简化的操作，体积小，易携带，几分钟就可用肉眼观察到颜色鲜明的实验结果，并可保存实验结果。

现有胶体金免疫层析技术在氯霉素检测的灵敏度和特异性还是存在缺陷，因而，有必要在现有技术上，从优化免疫抗原、包被抗原的结构及偶联技术角度出发，提高抗体的特异性、亲和力，从而增加氯霉素免疫胶体金快速检测的灵敏度和特异性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种通过优化偶联技术路线，以达到结构优化，提高抗体质量，从而进一步增加氯霉素免疫胶体金快速检测的灵敏度和特异性的免疫抗原和包被抗原。

为解决上述技术问题所采用的技术方案：一种用于检测氯霉素的免疫抗原和包被抗原的制备，其特征在于：采用活泼硫酯法，将氯霉素半抗原与载体蛋白进行偶联，制备氯霉素免疫抗原和包被抗原；所述氯霉素半抗原通过缩醛法为氯霉素引入间隔臂制备而成，具有式（I）所示结构，

所述氯霉素免疫抗原和包被抗原，具有式（II）所示结构，

在上述基础上，所述载体蛋白是指常规的可作为免疫载体使用的可溶性蛋白质。

在上述基础上，所述载体蛋白为牛血清白蛋白和/或卵清蛋白和/或血蓝蛋白。

采用本发明所带来的有益效果：

1、保留氯霉素的抗体识别部位，对硝基苯基部分，从远离特征结构、免疫原性最弱的羟基端引入间隔臂，提高了半抗原的免疫原性，同时保留氯霉素的骨架结构，提高特异性，确保半抗原不受蛋白的屏蔽作用；

2、引入的间隔臂具有一定的长度和适当的极性，将载体蛋白对小分子的电子排布和空间结构的影响降到最低；

3、合成的半抗原有利于提高半抗原与载体蛋白的偶联比，并且能更好地暴露半抗原的抗原决定簇；

4、对虾、蟹、鸡、鱼、猪肉组织，蜂蜜，牛奶，具有除痘除螨功效的面霜、爽肤水、洗面奶类化妆品，检测灵敏度达0.10μg/kg，特异性证明与氯霉素的交叉反应率为100%，与青霉素、新霉素、土霉素、庆大霉素、链霉素、四环素、甲砜霉素、氟甲砜霉素等化合物交叉反应在1%以下，假阳性率在3%以下。

附图说明

图1为采用本发明的检测卡及结果判定示意图。

图中，1、2为阴性结果，3、4为阳性结果，5、6为无效结果，C为控制线，T为检测线，S为加样孔。

具体实施方式

1缩醛法合成氯霉素半抗原