[发明专利]一种北美枫香优选单株叶片离体培养的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种北美枫香优选单株叶片离体培养的培养基，其特征在于，包括两种基本培养基，（1）、诱导愈伤组织形成的第一类基本培养基，每升第一类基本培养基中含有：硝酸钾1500-2000mg，硝酸铵1300-1700mg，磷酸二氢钾130-180mg，硫酸镁250-380mg，二水氯化钙440mg，碘化钾0.83mg，硼酸6.2mg，四水硫酸锰22.3mg，七水硫酸锌8.6mg，二水钼酸钠0.25mg，五水硫酸铜0.025mg，氯化钴0.025mg，七水硫酸亚铁27.8 mg，乙二胺四乙酸钠37.3 mg，维生素B1 0.1 mg，维生素B6 0.5 mg，VB5 0.5 mg，甘氨酸2.0 mg，肌醇100 mg，蔗糖30000 mg，卡拉胶6500 mg；（2）、用于分化增殖培养、壮苗培养、生根培养的第二类基本培养基，每升第二类基本培养基中含有：四水硝酸钙375-560mg，硝酸铵270-405 mg，硫酸钾610-920 mg，七水硫酸镁250-380 mg，磷酸二氢钾120-180mg，二水氯化钙78-99 mg，四水硫酸锰22.5 mg，七水硫酸锌8.6 mg，硼酸6.2 mg，五水硫酸铜0.25 mg，二水钼酸钠0.25 mg，七水硫酸亚铁34.1 mg，乙二胺四乙酸钠46.6 mg，维生素B₁ 1.0 mg，维生素B₆ 0.5 mg，VB₅ 0.5 mg，甘氨酸2.0 mg，肌醇100 mg，蔗糖20000 mg，卡拉胶6500 mg。

2.一种北美枫香优选单株叶片的离体培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、按照权利要求1的组分和质量，配制第一类基本培养基和第二类基本培养基；

S2、采用多年生一种北美枫香优选单株的当年生嫩叶片为外植体，经70%酒精消毒30-45秒，再用0.1%的升汞溶液灭菌6-8分钟，用无菌水冲洗3-5次；

S3、在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒过的外植体接种在经消毒的含有诱导愈伤组织培养基的三角瓶中，先将三角瓶置于黑暗条件下15-20天后，再置于普通日光灯为光源、光照强度为2000lx的环境中，每日光照15小时，温度20-25℃、湿度为50%-60%，培养35天，长成愈伤组织；

所述的诱导愈伤组织培养基为：每升第一类基本培养基中还含有：玉米素0.1-0.5mg、6-苄基嘌呤0.8-1.2 mg、α-萘乙酸0.2-0.3 mg、2,4-二氯苯氧乙酸0.6-1.0 mg；

S4、将步骤S3培养得到的愈伤组织，剪切，转接于经消毒的含有分化增殖培养基的三角瓶中，进行增殖培养，分化长成试管芽苗，直至达到所需要的生产规模；

所述的分化增殖培养基为：每升第二类基本培养基中还含有：玉米素0.5-1.0mg、6-苄基嘌呤1.2-1.5 mg、α-萘乙酸0.1-0.15 mg；

S5、将步骤S4培养得到的试管芽苗，剪切，接种于经消毒的含有壮苗培养基的三角瓶中，进行壮苗培养30天，得到试管壮苗；

所述的壮苗培养基为：每升第二类基本培养基中还含有：玉米素0.3-0.8 mg、6-苄基嘌呤0.5-1.5 mg、α-萘乙酸0.05-0.15 mg；

S6、将步骤S5培养得到的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3片叶片，接种于经消毒的含有生根培养培养基的三角瓶中，进行生根培养7-10天，得到生根小苗；

所述的生根培养基为：每升第二类基本培养基中还含有：α-萘乙酸0.2-0.5 mg、吲哚乙酸0.5-0.7 mg和柠檬酸50-100 mg；

S7、将步骤S6中生长的生根小苗，取出清洗，移栽到泥炭、黄心土、砻糠灰体积比为1：2：1的混合基质中，浇透水，保持温度28℃左右，相对湿度85%以上，前7天遮光70%，后逐渐见光，12天后生根成活，生根率达92%以上，30天左右，全光照。

3.根据权利要求2所述的一种北美枫香优选单株叶片的离体培养方法，其特征在于，所有培养基的pH值均调至5.6。

4.根据权利要求3所述的一种北美枫香优选单株叶片的离体培养方法，其特征在于，采用氨水或稀盐酸对培养基的pH值进行调节。