[发明专利]一种蕲蛇水溶性总蛋白冻干粉的制备方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种蛋白冻干粉的制备方法，特别涉及一种蕲蛇水溶性总蛋白冻干粉的制备方法。

（二）背景技术

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种以侵蚀性关节炎为主要表现的全身性自身免疫病。主要临床表现为对称性、持续性关节肿胀和疼痛，常伴有晨僵，受累关节以近端指间关节，掌指关节，腕、肘和足趾关节最为多见，部分患者可出现发热、贫血、皮下结节及淋巴结肿大等关节外表现。该病好发于中年女性，致残率较高，发病1年内致残率可高达20%，10年内可达60%左右。在中国，RA患病率为0.3-0.6%，而在发达国家成人中的发病率高达0.5%-1%。现代医学对于RA的药物治疗主要包括非甾体抗炎药(NSAIDs)、病情改善抗风湿药(DMARDs)、糖皮质激素以及生物制剂，但效果个体差异明显，毒副作用较大，这是临床使用抗风湿药面临的主要问题。

类风湿关节炎属中医“痹证”范畴，多由正气不足，感受风、寒、湿、热之邪所致，常呈慢性进行性过程，病程长，其证多顽固难已。清代叶天士指出：“风寒湿三气合而为痹，经年累月，外邪留著，气血俱伤，化为败瘀凝痰，混处经络，须用虫类搜剔，以动药使血无凝着，气可宣通。”蕲蛇是常用的虫类药，又名白花蛇，乃蝰科动物五步蛇的干燥体，味甘、咸，性、温。有毒，入肝脾二经，能搜风通络、攻毒定惊。善行而无处不到，外达皮肤，内通经络，且透骨搜风之力尤强，被称为截风要药，对于治疗痹证有着显著效果。现代研究发现，蕲蛇能促进垂体前叶促肾上腺皮质激素的合成与释放，使血中的这种激素浓度升高，产生抗炎、消肿镇痛作用，且无激素样的副作用。但是，蕲蛇现已被列为国家二级濒危保护动物，药材名贵，价格较高，而且来源有限，人工养殖较困难，因此，如何最大程度利用蕲蛇的药用价值，是临床使用蕲蛇急需解决的问题。

本发明人认为应当利用现代先进的科学技术发掘传统药物的特效成分，制成简便易服、易推广的剂型，同时使药物更好的被人体吸收，以较少的药材发挥最大的作用，进而充分发挥其对类风湿关节炎的治疗作用。

（三）发明内容

传统中药多以煎剂、散剂入药，存在药物有效成分吸收欠佳、不易保存及疗效不稳固等不足。本发明旨在克服以上不足，改进蕲蛇水溶性总蛋白冻干粉的制作工艺，制成可以良好吸收、长久保存及疗效稳定的冻干粉剂型，从而确保了传统中药的有效利用和临床推广。同时，通过不同剂型的动物实验比较，证实其无毒、无副作用，且疗效较传统煎剂和散剂更优。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种蕲蛇水溶性总蛋白冻干粉的制备方法，所述方法为：将蕲蛇（优选蕲蛇饮片）干燥、粉碎，制成蕲蛇粉末，将蕲蛇粉末与水以质量比1：5～20混合，在60～100℃条件下密闭煎煮20～60分钟（优选60℃煎煮30min），将提取液离心，取上清液冷却至0℃，然后缓慢加入固体硫酸铵至饱和度为40%～60%，4℃静置2小时，离心，收集沉淀，将沉淀加水溶解后以超纯水（优选MiliQ超纯水）为透析液进行透析，更换透析液至透过液中不含硫酸铵，取截留液，过滤，滤饼冷冻干燥，获得蕲蛇水溶性总蛋白冻干粉。

进一步，优选所述水均为MiliQ超纯水。

进一步，优选所述蕲蛇粉末与水的质量比为1：15～20，更优选1:20。

进一步，优选所述滤饼冷冻干燥的条件为：-50～-70℃℃冷冻干燥24～48h，更优选-60℃冷冻干燥48h。

更进一步，本发明所述蕲蛇水溶性总蛋白冻干粉的制备方法推荐按如下步骤进行：将蕲蛇干燥、粉碎至粒径为60～100目，制成蕲蛇粉末，将蕲蛇粉末与MiliQ超纯水以质量比1:20混合，在60℃密闭煎煮30min，将煎煮液在4℃、1200×g条件下离心10min，取上清液冷却至0℃，然后缓慢加入固体硫酸铵至饱和度为60%，4℃静置2小时，离心，收集沉淀，将沉淀加MiliQ超纯水溶解后以MiliQ超纯水为透析液进行透析，更换透析液至透过液中不含硫酸铵，取截留液，用0.45μm滤膜过滤，滤饼在-50～-70℃冷冻干燥24～48h，获得蕲蛇水溶性总蛋白冻干粉；所述透析是在截留分子量1000的透析袋中进行。